Можно ли приостановить деятельность ип: Можно ли приостановить деятельность ИП?

Содержание

Временное приостановление деятельности ИП

Для многих предпринимателей актуальным является вопрос о том, можно ли не прибегать к процедуре банкротства, а сделать перерыв в своей деятельности.
Иногда для того, чтобы не допустить разорения или убытков, дождаться более благоприятного времени или успеть решить личные проблемы, мешающие ведению бизнеса, бывает просто необходимо взять некоторый тайм-аут.

  • Неужели для этого придется закрывать дело?
  • А если планируется возвращение, придется проходить процедуру открытия снова?
  • Как выгоднее и проще поступить частному предпринимателю в такой ситуации?
  • Как правильно оформить такой процесс документально?
  • Какими могут быть варианты несоблюдения «протокола» и чем они чреваты для владельца бизнеса?

Разрешит ли закон «затаиться на время»

Индивидуальный предприниматель потому так и называется, что ведет бизнес на свой страх и риск, по своему разумению, отчитываясь перед законом в установленные сроки и отчисляя положенные взносы и налоги. Какова стратегия ведения дел в частной фирме, ООО или у бизнесмена-одиночки, закон не регламентирует. Поэтому на случай возникновения ситуации, когда предприниматель не считает возможным временно заниматься своим «детищем», в российском законодательстве не предусмотрено специальных нормативных актов.

Поэтому на вопрос, можно ли на время приостановить деятельность индивидуального предпринимателя, закон не дает положительного ответа. Действовать или нет в интересах бизнеса, совершать ли какие-либо действия для получения прибыли либо оставить все как есть – личное решение индивидуального предпринимателя. Пока предприятие не снято с учета, оно считается действующим, так же, как остаются действительными все лицензии, разрешения, патенты и свидетельства.

Зарегистрированный бизнесмен является частным предпринимателем, пока он не выполнил предписанных законодательством действий по лишению себя этого статуса, то есть не закрыл ИП.

ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ! Закон позволяет проводить процедуру закрытия и открытия ИП неограниченное количество раз.

Отчет не подождет

Поскольку деятельность официально не закрыта, для государства не имеет значения, происходят ли какие-то движения для извлечения прибыли, это компетенция хозяина бизнеса.

Раз предприятие официально числится работающим, о деятельности его надо отчитываться, даже если деятельности нет. Обязанность предпринимателя перед страховым и Пенсионным фондом, а также перед налоговиками, отмене не подлежит. Если на бизнесмена работают наемные работники или просто числятся в штате, им придется продолжать начислять гарантированную заработную плату.

Налоговая отчетность, как и положенные взносы, должна быть сдана вовремя. Если предприниматель, прекратив работу, просто перестанет сдавать декларации и платить положенные взносы, ему будут начислены не только штрафы, но и пени за просрочку. Пени, кстати, можно рассчитать прямо на нашем сайте. Суд в этом случае не будет на стороне бизнесмена, поскольку закон считает его предприятие «живым», пока оно не закрыто официально.

Кому как выгоднее?

Перед предпринимателем, решившим временно отойти от дел, встает выбор из двух вариантов:

  • фактически не работая, продолжать вовремя отчитываться перед государством и платить положенные сборы;
  • официально закрыть ИП по предусмотренной законом процедуре и быть свободным в своих действиях вплоть до последующего открытия вновь, если такое решение будет принято.

Вы ­– «упрощенец»? Вам проще

Первый вариант будет более выгодным бизнесменам, чья работа строится на упрощенной системе налогообложения. Да, им также придется подавать налоговую декларацию, но, поскольку деятельность не ведется, прибыль в ней будет указана как нулевая. В таком случае, налоги к уплате начисляться не будут, останется только фиксированный взнос в Пенсионный фонд. Предприниматель должен решить сам, стоят ли эти средства и хлопоты статуса ИП. Обычно предпринимателям не так уж сложно подавать нулевую декларацию и обеспечивать свою будущую пенсию. А вернуться к деятельности они могут тогда, когда пожелают.

«Пустая» декларация (так называемая нулёвка), даже подаваемая в течение длительного времени, никаких последствий для бизнесмена иметь не будет.

Плательщик единого налога, подумай дважды

Для тех предпринимателей, кто находится на общей системе налогообложения, приостановка деятельности окажется невыгодной. Фактической прибыли извлекать бизнесмен не будет, а расходы останутся прежними, ведь взыскания будут стабильными, не смотря ни на что.

Стоит подумать, что перевесит: постоянные отчеты и выплаты, отменить которые нельзя, или хлопоты и пошлины, связанные с процедурой закрытия и, по необходимости, последующего открытия ИП.

Имеет значение и срок, на который предприниматель собирается оставить деятельность. При долгом времени ожидаемого бездействия целесообразнее будет закрыть предприятие. Ничто не помешает открыться вновь, если планы предпринимателя изменятся.

Документы и оформление

Каких заявлений вправе ожидать официальные инстанции от предпринимателя, приостанавливающего деятельность? Никаких, поскольку формально остановки работы не происходит. Заявление на приостановление деятельности ИП не может быть написано, раз не существует законных оснований для такого акта. Каких же документов вправе ждать налоговые органы от неработающего предпринимателя, кроме налоговой декларации?

  1. Заявление на закрытие. Если налоговики и получат от предпринимателя какое-либо законное заявление, это может быть только форма Р65001, в которой предприниматель просит закрыть ИП. Не имеет значение заполнение формы на компьютере или от руки, главное, чтобы в ней не было помарок, ошибок и исправлений.
  2. Справка из ПФР. К такому заявлению нужно приложить справку из Пенсионного фонда о том, что вы там зарегистрированы и платите положенные взносы. Если бизнесмен не успел получить такую справку, налоговая запросит ее в ПФР сама.

ВАЖНО! Задолженность перед Пенсионным фондом, если она есть, не интересует налоговиков, ведь это различные ведомства. Положенные взносы можно совершить и позже, главное, чтобы это произошло без просрочки по пенсионному законодательству, если не улыбается платить штраф.

Что дальше?

  • Спустя 5 суток в налоговой предпринимателю выдадут удостоверение о том, что отныне он – бывший предприниматель: деятельность его ИП прекращена.
  • Еще через 12 дней ему будет нужно отчитаться перед Фондом социального страхования и известить ПФР о прекращении своего статуса.
  • Если был открыт расчетный счет, необходимо позаботиться о его закрытии, иначе с него ежемесячно будет взиматься плата за обслуживание, даже если никаких средств на него более не поступает.
  • Если у предпринимателя имелся для расчетов кассовый аппарат, его надо снять с регистрации, иначе начислят штраф.

А я опять хочу работать!

Закон предоставляет ИП возможность самому принять решение о том, хочет ли он осуществлять предпринимательскую деятельность, и как скоро к ней возвращаться, если это вопрос решенный. Срок между закрытием и открытием ИП может быть абсолютно любым. Повторная регистрация проходит по установленной процедуре в том же налоговом органе.

Итоги и выводы

  1. Приостановить деятельность ИП без прекращения выполнения обязанностей перед государством нельзя.
  2. Предприниматель, не ведущий деятельность, должен сохранять все статусы и полномочия работодателя:
    • подавать декларацию в налоговую с нулевой графой прибыли;
    • платить единый налог, если это предусмотрено регистрацией;
    • оплачивать сбор в ПФР;
    • продолжать вести книгу расходов и доходов;
    • подавать данные о численности штата;
    • выплачивать заработную плату, если работники не уволены.

легальные способы, заявление на временную приостановку

Ошибочно мнение, что индивидуальный предприниматель может лишь вести активную деятельность. А не получается – надо закрываться. Есть еще один вариант: деятельность можно на время приостановить. Как грамотно провести временное приостановление деятельности ИП и не заработать лишних проблем?

Как приостановить деятельность

Для начала оцените, как долго вы не сможете выполнять свои функции. Если предстоит продолжительное прекращение деятельности, то можно на время закрыть ИП, подав соответствующее заявление в ФНС. Законом предусмотрена возможность неограниченного количества открытий и закрытий своего дела, а сам статус предпринимателя не имеет срока действия.

Порядок закрытия ИП в 2017 году проходит по стандарту: вы подаете заявление по форме №Р26001, уплачиваете госпошлину и снимаете с учета контрольно-кассовый аппарат (ККМ). Образец заполнения можете скачать тут.

Если вы решили приостановить свою деятельность на короткий срок, то дальнейшие действия зависят от налогового режима, на котором вы находитесь. ОСНО и УСН – те системы, на которых налоги отчисляются в зависимости от доходов, приносимых бизнесом. Доходов не будет – не станет и выплат в налоговую службу. Однако декларации, хоть и нулевые, подавать вы обязаны.

Закон разрешает открывать и закрывать ИП неограниченное количество раз, а статус предпринимателя бессрочен.

Налоговые режимы ЕНВД, ЕСХН и ПСН предусматривают фиксированные выплаты, поэтому временное приостановление деятельности ИП на них никак не отражается – выплаты должны производиться регулярно. Если вы работаете в режиме ЕНВД, то можете подать заявление в ФНС для снятия с учета в качестве плательщика данного налога. Как только деятельность будет возобновлена, вновь подайте заявление для постановки на учет по выплате «вмененки».

Обязанности ИП

Так устроена система, что фактическое прекращение деятельности ИП не освобождает его от ответственности перед налоговой инспекцией (ФНС), Пенсионным фондом (ПФР) и Фондом социального страхования (ФСС).

Рассмотрим обязанности предпринимателя, которые сохраняются за ним на время перерыва в работе:

  1. Предприниматель обязан подавать в установленные сроки всю необходимую отчетность в ФНС, ПФР и ФСС. Отсутствие доходов при этом не имеет никакого значения – ряд деклараций будет нулевым.
  2. Обязательно нужно оплатить фиксированные взносы в Пенсионный фонд (ПФР) и Фонд социального страхования (ФСС).
  3. Необходимо подавать сведения о среднесписочной численности сотрудников (ССЧ). Нельзя забывать, что, если у вас есть сотрудники, вы несете ответственность как работодатель. У принятых на работу людей есть трудовые права – не стоит их игнорировать, чтобы потом не было проблем с законом.
  4. Предпринимателю необходимо продолжать вести книгу учета доходов и расходов (КУДиР). Это нужно как для отчетов, так и для вашего спокойствия.

Приостановление деятельности подходит для тех предпринимателей, которые не хотят собирать пакеты документов для закрытия и открытия бизнеса дважды. Если вы решили взять паузу, то помните, что это не освобождает вас от обязанностей перед ведомствами и своими сотрудниками. А забытые декларации или отчеты повлекут за собой многочисленные штрафы и пени.

Как приостановить деятельность ИП: порядок процедуры

Приостановление деятельности ИП – процедура, непредусмотренная действующим законодательством. Желание временно «заморозить» бизнес способно возникнуть из-за семейных, личных обстоятельств, необходимости сделать перерыв, убытков и т.д.

Приостановление можно производить без уведомления государства, без оформления заявления и прочего. С точки зрения бюрократических процедур оно не влечет последствий.

Однозначно ответить на вопрос: «Как приостановить деятельность ИП?» — нельзя.

Добровольная процедура

Сам предприниматель не вправе приостановить работу на непродолжительный промежуток времени. До момента официальной ликвидации он обязан выполнять обязательства перед государством и контрагентами. Фактически ИП вправе только полностью прекратить существование статуса.

Если приостановить работу бизнесмен хочет официально на непродолжительный период времени, то данный вариант не подходит. Придется дважды проходить через регистрационные процедуры – для закрытия ИП и перед повторным открытием бизнеса.

Приостановление деятельности может представлять собой ее неофициальное, но реальное прекращение – ИП сохраняет статус, но бизнес не ведет и прибыль не получает.

Даже этот период сопровождается обязанностями предпринимателя:

  1. своевременно передавать в государственные органы отчеты и декларации;
  2. вносить обязательные взносы за себя в ПФР и ФФОМС.

Прежде чем выбрать такой способ приостановки, можно определить выгодно ли это, так как бизнесмен не получит прибыли от предприятия, но затраты останутся прежними.

Невыполнение обязанностей влечет последствия, как и для действующих предпринимателей – штрафы и разбирательства в судебном порядке. При оформлении документации нужно составлять нулевые декларации. В графе прибыль указывается «0».

ИП не освобождается от обязанности вести книгу учета доходов и расходов.

Если у предпринимателя есть работники, то при временном приостановлении бизнеса их нельзя сократить в связи с ликвидацией. На практике эти действия не производятся. Предприниматель, как ИП должен уплачивать заработную плату и выполнять иные обязанности перед сотрудниками. Не исключается необходимость своевременно представлять отчеты в ФСС и вносить платежи за работников.

В случае временной приостановки работы можно договориться о расторжении трудового договора по соглашению сторон. В противном случае – увольнение признается незаконным.

Важно! Обязанности ИП в период приостановки бизнеса – сдача отчётности в ФНС, ПФР и ФСС, оплата налогов в соответствии с выбранным режимом, внесение платежей во внебюджетные фонды.

Уплата налогов в период бездействия

Обязанности перед налоговой инспекцией сохраняются в течение срока действия статуса ИП. Размер налогов определяется исходя из выбранного режима налогообложения.

Предпринимателям на ОСНО и УСН можно сдавать нулевые декларации. Налог не уплачивается в случае не поступления прибыли. ИП, выбравшие ЕНВД и ПСН, вносят обязательные платежи вне зависимости от факта ведения бизнеса.

Законодательство о приостановке предпринимательской деятельности

В действующих нормативно-правовых актах детально урегулирована процедура ликвидации статуса ИП. Нормы закреплены в ГК РФ и ФЗ №129.

Перерыв в работе на добровольной основе не регулируется законодателем. Не разработана форма заявления на приостановление деятельности на время. Фактически данные действия – это право ИП. Ему можно заниматься бизнесом или нет. Статус ИП — бессрочен. Предприниматель может быть лишен его только в случаях установленных законом. Отсутствие реальной прибыли и работы не является основанием для ликвидации ИП.

С бюрократической точки зрения отсутствует значение у факта временного прекращения работы бизнесмена. Акты, представленные предпринимателю в период функционирования, сохраняют легитимный характер.

Практический опыт приостановки бизнеса

Предприниматели не всегда правильно приостанавливают деятельность. Чаще всего они просто отходят от дел – закрывают магазин, предприятие и т.д. Бюрократические процедуры при этом не выполняются. Данная ошибка чревата штрафами и санкциями.

Заканчивается такое положение после того, как бизнесмен получает уведомления от государственных служб с требованием передать декларацию, уплатить взносы и прочее.

Оспорить решение налоговой инспекции или внебюджетных фондов не получится. Действия государственных служб, в этом случае, не противоречат действующему законодательству.

Альтернативный вариант

Когда ИП хочет прекратить работу на длительное время, то он вправе ликвидировать этот статус.

Процедура предусматривает следующие этапы:

  1. формирование заявления и пакета документированных сведений;
  2. оплата государственной пошлины;
  3. передача собранных данных в налоговую службу;
  4. получение готового свидетельства по истечении 5 рабочих дней.

Процесс, как и при открытии ИП. По результатам проведения вносятся изменения в ЕГРИП. С этого момента вести предпринимательскую деятельность бизнесмен не должен. Действия по ее осуществлению можно признать незаконными и наложить санкции на правонарушителя.

Данный вариант позволит избежать затрат на взносы и платежи. ИП освобождается от обязанности сдавать отчетность и платить взносы в казну. Ему только нужно правильно ликвидировать дело. В противном случае – штрафы и санкции со стороны государства.

Важно! Законодатель не ограничивает право физических лиц на многократное открытие и закрытие статуса ИП. Предпринимателю можно возобновить функционирование в любое удобное время.

Приостановление деятельности ИП – термин, разработанный реальной практикой. Предприниматель вправе заниматься бизнесом или отказаться от него на время. Данное решение – его право. Не нужно забывать, что даже временное приостановление деятельности не является основанием для освобождения от обязанностей перед государством. Они останутся действительными до момента ликвидации ИП.

Как приостановить деятельность ИП

При возникновении сложностей в бизнесе или личных обстоятельств может встать вопрос, как приостановить деятельность ИП. Можно ли это сделать быстро и без налоговых проверок и как правильно оформить документально? Для начала нужно определиться на какой срок вы хотите «заморозить» свой бизнес. После этого можно выбирать наиболее подходящий способ.

Итак, определившись на какой период необходимо приостановление деятельности ИП, начинаем действовать.

Закрытие не займет много времени, особенно если бизнес не крупный, подавалась вся отчетность, и уплачивались налоги и взносы. Обычно, через 5 дней налоговая инспекция выдает документ, подтверждающий снятие с регистрации в качестве индивидуального предпринимателя.

Если будет принято решение возобновить деятельность, нужно пройти процедуру регистрации, установленную законодательством РФ. Она ничем не отличается от первичного открытия. Сделать это можно в любой момент, подав заявление и квитанцию об оплате госпошлины.

Пошаговая инструкция по закрытию

Как было сказано приостановить деятельность невозможно. Если нет желания подавать отчетности в ФНС и ПФР и делать платежи, то нужно прекратить деятельность путем процедуры регистрации закрытия.

Основные этапы:

  • пишется заявление по форме Р26001;
  • платится государственная пошлина.

В налоговую инспекцию нужно сдавать документы лично. Если пользуетесь услугами посредника по доверенности, необходимо заверить заявление у нотариуса. Приостанавливается деятельность на основании получения выписки в течение 5 дней.

На протяжении 12 дней необходимо сняться с регистрации в Пенсионном фонде и выполнить свои обязательства по социальным взносам.

Фонд Социального страхования автоматически получает уведомление о закрытии ИП в 2019 году и снимает его с регистрации. Но если предприниматель использовал наемный труд, то ему необходимо лично посетить фонд, погасить обязательства, которые возникли в период работы и написать соответствующее заявление.

Важно помнить, что наемные работники должны быть уволены до временного прекращения деятельности. ИП делает полный расчет: начисляет заработную плату, компенсацию за неиспользованный отпуск и прочие выплаты.

В день увольнения работник получает причитающуюся сумму, а предприниматель перечисляет в бюджет взносы и подает отчетность.

Некоторые тонкости закрытия

Если при ведении деятельности применялась ККТ (контрольно-кассовая техника), то она снимается с регистрации до подачи заявления о ликвидации.

Нужно ли закрывать счет в банке? Законодательство не обязует делать это, но все же рекомендуется посетить отделение и написать соответствующее заявление. Это позволит в дальнейшем не платить за кассовое обслуживание.

Если предприниматель работал с печатью, уничтожать ее необязательно. Но стоит хранить в надежном месте, чтобы исключить попадания в руки мошенников. Если было несколько экземпляров, которыми пользовались работники (например, бухгалтер, сотрудник кадрового отдела или управляющий), то перед увольнением они сдают печати предпринимателю.

Важно рассчитаться со своими контрагентами в срок между закрытием и получением свидетельства из налоговой инспекции. ИП несет ответственность всем своим имуществом, поэтому если есть долги перед поставщиком, он может взыскать их в судебном порядке. А это уже будут совсем другие суммы по сравнению с обязательствами по договору.

Придется заплатить:

  • судебные издержки;
  • пени;
  • неустойки.

Если бизнес активно работал и имел большие обороты, перед тем как приостановить деятельность рекомендуется провести аудиторскую проверку своими силами или с привлечением специалистов. Это позволит исправить нарушения и избежать штрафных санкций со стороны контролирующих органов.

Проверки после закрытия

Приостановление деятельности ИП не освобождает от налоговых проверок. Важно помнить, что хранить документацию нужно 4 года после ликвидации.

Проверки могут быть следующие:

  1. Камеральная. Необходима для контроля полноты и своевременности перечислений налогов и взносов.
  2. Выездная. Проводится на протяжении 3 лет после закрытия. Длится до 2 месяцев, но при необходимости продлевается до 6 месяцев.

Основанием для проведения камеральной проверки служит документация, связанная с деятельностью ИП, отчетность, платежные ведомости. Осуществляется на протяжении 3 месяцев, после предоставления необходимых документов.

Такому контролю подлежат только ИП, на юридические лица после ликвидации не распространяется.

При выездной проверке инспектор не может приехать к предпринимателю домой без предупреждения.

Уполномоченный сотрудник налоговой инспекции имеет право:

  • потребовать предоставления необходимой документации;
  • пользоваться информацией свидетелей;
  • осматривать помещения и территории, где велась деятельность;
  • запрашивать сведения у контрагентов;
  • пользоваться услугами экспертов;
  • делать инвентаризацию.

Чтобы избежать негативных последствий после ликвидации, нужно грамотно вести бизнес, избегать нарушений законодательства. Рекомендуется пользоваться услугами аудиторов, юристов и экспертов. Это позволит пройти проверку без штрафных санкций и других форм наказания.

Каждый человек имеет право на повторное открытие ИП. Срок между закрытием и новой регистрацией законом не предусмотрен.

Особенности приостановления без закрытия

Если планируется не вести бизнес некоторое время, но сниматься с регистрации нет желания, нужно помнить о своих обязательствах.

Важные аспекты:

  1. Предприниматель обязан подавать отчетность в налоговую инспекцию, фонд соцстраха, пенсионный фонд. Это требование выполняется, даже если нет дохода. Декларации могут быть «нулевыми».
  2. Необходимо перечислять взносы и платежи ИП в установленные законодательством сроки.
  3. Вести книгу учета, даже если проводились единичные операции.
  4. Нести ответственность перед работниками. Предоставить отпуск за свой счет на допустимый законодательством период, не забудьте о компенсации за простой. При желании сотрудника уволиться, не препятствовать этому, выплатить все причитающиеся денежные средства: заработную плату за отработанный период, больничные, компенсацию за неиспользованный отпуск.

Неважно, ликвидировано ИП или временно приостановлено, бизнесмен обязан предоставлять бывшим работникам, требуемые документы, это может быть справка о заработной плате за определенный период или копия приказа об увольнении.

Выполняя все эти требования, ИП избежит негативных последствий в виде штрафов, административной и даже уголовной ответственности.

Приостановление деятельности ИП — можно ли приостановить деятельность ИП

Почти всегда начинающие предприниматели видят только одну сторону ведения предпринимательской деятельности – получение прибыли, совсем не задумываясь, что успешность предприятия связана с огромным вкладом собственных усилий, финансовых вложений, наличия «полезных» связей, и некоторыми личными чертами характера. И так как самая распространенная форма ведения предпринимательской деятельности в нашей стране остается ИП, то наряду с вопросом – как открыть ИП, весьма актуален другой – как закрыть ИП. Но действительно ли нужно прекращать регистрацию ИП, или есть возможность остановить на время предпринимательскую деятельность, пока дела не «пойдут в гору»? Возможно или нет приостановление деятельности ИП – читайте в данной статье.


По статистике, спустя год после начала бизнеса, «на плаву» остаются лишь 1/5 запущенных проектов. Основной причиной провала остальных чаще всего бывает слабая подготовка при организации бизнеса, неграмотно составленный бизнес-план, либо вовсе его полное отсутствие, и полагание на русское «авось». Недаром наши предки говорили: «Семь раз отмерь, а один раз – отрежь» – мудрость, доказанная веками чужого опыта.

Кстати, для того, чтобы составить грамотный бизнес-план, который проведет вас по предпринимательскому пути с минимальными потерями, и позволит избежать многих ошибок в бизнесе, присущих новичкам, «Свой бизнес» предлагает вам серию статей по самостоятельному написанию бизнес-плана:

к оглавлению ↑

Нужно ли прекращать деятельность ИП после первой неудачи?

Итак, ваш бизнес близок полному провалу, клиентов нет, продаж нет, денег нет, опасность глубокой депрессия уже «на носу», и на горизонте будущего – полное отсутствие каких-либо внятных перспектив. В общем – картина мрачнее некуда. Пора закрывать ИП, завязывать с предпринимательской деятельностью навсегда, устраиваться на работу, и жить жизнью большинства обывателей.

Но так ли действительно все печально? Может быть просто попробовать взять временную передышку? Взглянуть на свой убыточный бизнес свежим взглядом после некоторого отдыха, поменять концепцию, вдохнуть в дело «глоток свежего воздуха», и начать все сначала. Ведь недаром интернете пестрит историями многих успешных людей, которые добивались ошеломительных результатов со 2 раза, с 5-го, 10-го, после сотой попытки, в то время как в их проекты никто не верил!

к оглавлению ↑

Можно ли приостановить деятельность ИП на время?

Вот мы и подошли к самой сути вопроса, ответ на который прост: в российском законодательстве отсутствует юридически закрепленное понятие «приостановка деятельности ИП». Данная процедура не регламентирована никакими документами.

Иными словами, если у вас возникнет проблема как приостановить деятельность ИП, вам просто нужно прекратить вести свое дело. Но есть одно существенное «но» – даже если вы перестанете вести бизнес, обязательства по уплате налогов и отчислений в Пенсионный Фонд, выплате заработной платы сотрудникам, с вас не снимается. В противном случае вам грозит наложение штрафных санкций и выплата энных сумм в местный бюджет. Подробнее о том, какие налоги платит ИП можно узнать здесь – https://business-poisk.com/kakie-nalogi-platit-ip.html.

Несправедливо? Может быть. Но пока другого механизма, кроме полного закрытия ИП в добровольном либо принудительном порядке, не предусмотрено. Если вы не намерены в недалеком будущем начинать свой бизнес вновь, то вам так и следует поступить – прекратить деятельность ИП. Если же вы решили взять «передышку», и через некоторое время возобновить предпринимательскую работу – приостановление деятельности ИП – это то, что вам нужно.

В том же случае, если процедура закрытия и регистрации ИП вновь не составляет вам хлопот, и общение с налоговой службой доставляет вам удовольствие…

В случае приостановления деятельности ИП, может также возникнуть один нюанс. Так как вам придется подавать налоговую декларацию и отчитываться о своих доходах, то у налоговых инспекторов может возникнуть вполне обоснованное подозрение, когда они увидят нули в большинстве граф документа: а не прячете ли вы свою прибыль от государства? Что может привести к проверкам вашего бизнеса.

Чтобы этого избежать, советуем поставить в известность налоговые органы о том, что некоторое время от вас будут приходить «нулевые» декларации о налогах по такой-то причине. Кстати, не забудьте, что в любом случае, все документы, которые касаются деятельности ИП, вам необходимо хранить в течение 4 лет.

Понравилась статья? Жми на одну из кнопок — расскажи друзьям, это лучшая благодарность!

Оцените статью

Загрузка…

Административное приостановление деятельности — Эльба

У госорганов есть право на три месяца остановить бизнес. Такое бывает за нарушение санпинов, пожарной безопасности и некоторых других законов. 

Из-за остановки предприниматель теряет прибыль. А ещё рискует заплатить штраф и вообще потерять своё дело, если не разберётся с нарушениями. Проблемы нарастают, как снежный ком.

Мы ответили на основные вопросы о приостановлении деятельности. Они помогут действовать эффективно, если это коснулось вас.

В чём суть административного приостановления деятельности?

Административное приостановление деятельности — это наказание за нарушение закона по ст. 3.12 КоАП РФ. 

Предпринимателю запрещают работать в конкретном помещении, оказывать услуги или торговать на срок до трёх месяцев. Тут же говорят, какие нарушения надо устранить. 

Например, пиццерию закрывают из-за шумной вентиляции не по санпину. Значит, предприниматель должен решить вопрос с уровнем шума.

Бизнес ставят на стоп по решению суда. В суд обращаются Роспотребнадзор, МЧС или миграционная служба после внеплановой проверки — зависит от нарушения. Проверяют по жалобе клиента, работника или конкурента. Остановка деятельности в малом бизнесе — всегда результат чьей-то жалобы.

После решения суда к предпринимателю в течение суток приходят приставы. Они опечатывают двери и окна, накладывают пломбы на кассы, холодильники, печи. Если в помещение не пускают, приставы зовут полицию.

Приставы составляют акт о приостановлении деятельности. С этого дня считают срок. 

Закрыть бизнес могут и до суда, если есть опасность эпидемии или катастрофы. Это называется временным запретом деятельности по ст. 27.16 КоАП РФ. Временный запрет засчитают в срок приостановления деятельности.

При наложении пломб приставам нельзя портить отделку, замки и оборудование, выключать холодильник с продуктами и вредить как-то ещё. Это сказано в ст. 32.12 КоАП РФ. Если сотрудники что-то испортили, можно взыскать деньги. 

Дальше предприниматель берётся за нарушения, а приставы следят. В опечатанное помещение заходят по согласованию с ними.

После устранения нарушения предприниматель работает дальше — наказание снято.

Как предпринимателю защититься при административной проверке

Как подготовиться к проверке Роспотребнадзора

За что приостанавливают деятельность?

Небольшому бизнесу грозит приостановка за:

— нарушение санпинов в общепите, парикмахерской;

— вывоз мусора не по санпинам;

— нарушение пожарной безопасности в помещении;

— опасные условия труда для продавцов, мастеров;

— торговлю товарами без возрастной маркировки;

— труд иностранцев без разрешения на работу или неуведомление миграционной службы;

— концерты с матом в баре.

Например, кафе и рестораны часто закрывают по ст. 6.6 КоАП РФ за нарушения санпинов на кухне.

Закрывают не за всякое нарушение. Проверяющие должны увидеть угрозу людям, порядку, нравственности или природе. Принцип такой: если не закрыть сейчас, потом будет хуже.

За небольшие нарушения не закрывают, а назначают штраф.

Требования пожарной безопасности простыми словами

Сдавайте отчётность в три клика

Эльба возьмёт бухгалтерию на себя. Сервис подготовит отчётность и отправит её через интернет. Рассчитает налоги, уменьшит на взносы — и вы получите готовые платёжки для оплаты.

А можно выбрать приостановление деятельности вместо штрафа?

За многие нарушения закон предлагает два наказания: штраф или приостановление деятельности. Наказание выбирает суд. 

Часто предпринимателю дешевле перетерпеть остановку бизнеса, чем заплатить штраф. 

Например, за найм иностранцев в Москве без разрешения на работу юрлицу грозит штраф до 1 000 000 ₽ или приостановление деятельности по ст. 18.15 КоАП РФ. 

В сравнении с максимальным штрафом потеря прибыли и хлопоты с разрешением от миграционной службы многим покажутся мелочью.

Заменить штраф на приостановление деятельности нельзя. 

Считается, что приостановление суровее штрафа — ст. 3.12 КоАП РФ. Бизнес останавливают, когда есть опасность. Если чиновники не видят угрозу массовых отравлений, пожаров или падения нравственности, бизнес штрафуют. Правило странное: наказание легче, а предпринимателю больнее. 

Обжаловать штраф и просить приостановление бесполезно — вы проиграете. Такая замена запрещена пунктом 18.2 Постановления Пленума ВАС РФ от 02.06.2004 № 10.

Предприниматель ремонтировала фасад магазина. В подсобные рабочие взяла молодого человека из Узбекистана. Разрешение на работу не проверила. 

Кто-то пожаловался в миграционную службу и предпринимателя оштрафовали на 250 000 ₽.

Женщина пожаловалась в суд и попросила замену на приостановление деятельности. Мол, за это время оформят разрешение. 

В замене ей отказали, объяснив следующее. Остановка работы — это крайняя мера. Вы не поняли, штраф — лёгкое наказание, вам повезло. Тем более штраф выписали в самом маленьком размере. 

Дело № А06-6411/2012 

Что будет, если продолжить работать во время приостановления?

Во время остановки предпринимателя проверяют приставы. Они следят за целостностью печатей и пломб.

Если приставы узнают, что вы работали как ни в чём не бывало, составят новый акт и заново опломбируют. Время остановки увеличится на дни вашей работы.

Что будет, если тихо переждать приостановление?

Когда выйдет срок остановки, придёт чиновник, проводивший проверку. Теперь его задача — проверить устранение нарушений.

За неустраненные нарушения чиновник оштрафует по п. 1 ст. 19.5 КоАП РФ. Штраф небольшой: ИП до 500 ₽, юрлицу до 20 000 ₽. Но штрафом дело не кончится.

Формально после окончания остановки можно работать дальше даже с нарушениями. Но бизнес останется на контроле у чиновников. Рано или поздно придёт новая проверка, снова закроют, потом оштрафуют. Как в колесе сансары.

Ещё чиновник может через суд закрыть насовсем ваш опасный бизнес по ст. 1065 ГК РФ. Обычно запрещают работать в конкретном помещении или торговать определённым товаром. Но такой запрет для малого бизнеса может стать полным финишем.

Как быть с зарплатой, налогами и арендой, пока нельзя работать?

Остановка работы — проблема предпринимателя. От выплат поставщикам, арендодателю, налогов и взносов за персонал не освобождают.

Увольнять работников нельзя. Но по зарплате есть небольшие послабления.

Когда бизнес поставили на стоп из-за опасных рабочих мест, работодатель обязан платить средний заработок по ст. 220 ТК РФ. На это время работника можно перевести на другую работу. Например, администратору выдачи заказов в интернет-магазине поручить приём звонков клиентов. О переводе издают приказ.

При нарушении санитарных, пожарных и других правил принимают приказ о простое. Во время простоя сотрудники не работают, но получают две трети среднего заработка. Так сказано в ст. 157 ТК РФ. Или можно перевести на другую работу, но со средним заработком.

Как отменить приостановление деятельности раньше срока?

Бизнес останавливают, чтобы снять угрозу. Если нарушения убрали, можно открываться для клиентов, не выжидая конца срока. Но понадобятся формальности и немного времени. 

Предприниматель снова зовёт чиновника. Тот фиксирует, что с нарушениями разобрались и выдаёт акт. 

Дальше предприниматель подаёт в суд ходатайство о досрочном прекращении приостановления деятельности и прикладывает акт.

Суд рассмотрит ходатайство в течение пяти дней. Если вопросов нет, разрешат работать дальше. И можно выдохнуть.

Я хочу прекратить деятельность ИП | ФНС России

Содержание страницы

Формируем пакет документов

Вам потребуются следующие документы:

  • заявление о государственной регистрации прекращения физическим лицом деятельности в качестве индивидуального предпринимателя в связи с принятием им решения о прекращении данной деятельности (форма № Р26001)

    Подпись на заявлении должна быть засвидетельствована в нотариальном порядке, за исключением случая, когда заявитель представляет документы лично и одновременно представляет паспорт.

  • квитанция об уплате госпошлины в размере 160 руб.

    Перейти Сформировать квитанцию на уплату госпошлины с помощью сервиса: «Уплата госпошлины»
  • документ, подтверждающий представление сведений в территориальный орган Пенсионного фонда.

    Документ, подтверждающий представление сведений в территориальный орган Пенсионного фонда, не обязателен. Если заявитель не представит этот документ, нужную информацию территориальный орган Пенсионного фонда направит налоговому органу в электронном виде в рамках межведомственного обмена.

    Перечень сведений, представляемых в территориальный орган Пенсионного фонда, определен подп. 1–8 п. 2 ст. 6 и п. 2 ст. 11 Федерального закона от 01.04.1996 № 27-ФЗ «Об индивидуальном (персонифицированном) учете в системе обязательного пенсионного страхования», а также ч. 4 ст. 9 Федерального закона от 30.04.2008 № 56-ФЗ «О дополнительных страховых взносах на накопительную часть трудовой пенсии и государственной поддержке формирования пенсионных накоплений».

Представляем документы

Документы могут быть переданы в налоговую инспекцию любым удобным для вас способом:

  • непосредственно в инспекцию — лично или через представителя по доверенности.
  • в многофункциональный центр — лично или через представителя по доверенности. Информацию об оказании данной услуги в Вашем МФЦ необходимо уточнить на сайте МФЦ.
  • по почте с объявленной ценностью и описью вложения;

    В пределах территории Москвы документы можно направить и получить также через DHL Express и Pony Express.

  • в электронном виде.

    Подать документы Подать документы с помощью сервиса: «Подача электронных документов на государственную регистрацию юридических лиц и индивидуальных предпринимателей» Подать документы Подать документы с помощью сервиса: «Подача
    заявки на государственную регистрацию индивидуальных предпринимателей и юридических лиц»

Инспекция примет документы и выдаст (направит) расписку в их получении.

Получаем документы

На 6-й рабочий день после подачи документов заявитель лично или через представителя по нотариально удостоверенной доверенности может получить:

  • лист записи ЕГРИП

В случае отказа в государственной регистрации вы получите документ, в котором изложена причина отказа.

Перечень оснований для отказа в государственной регистрации определен п. 1 ст. 23 Федерального закона от 08.08.2001 № 129-ФЗ «О государственной регистрации юридических лиц и индивидуальных предпринимателей».

Документ могут направить в ваш адрес и по почте. В пределах территории Москвы документ можно получить также через DHL Express и Pony Express.


наночастиц серебра, полученных из Cedecea sp. проявляют антибиотикопленочную активность и замечательную стабильность

  • 1.

    Lebeaux, D., Ghigo, J. M. & Beloin, C. Инфекции, связанные с биопленками: устранение разрыва между клиническим ведением и фундаментальными аспектами непокорности к антибиотикам. Microbiol. Мол. Биол. Ред. 78 , 510–543. https://doi.org/10.1128/MMBR.00013-14 (2014).

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 2.

    Рой, Р., Тивари, М., Донелли, Дж. И Тивари, В. Стратегии борьбы с бактериальными биопленками: внимание к антибиотикам и механизмам их действия. Вирулентность 9 , 522–554. https://doi.org/10.1080/21505594.2017.1313372 (2018).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 3.

    Цзян, Ю., Гэн, М. и Бай, Л. Таргетинг на терапию биопленками: текущие стратегии исследований и препятствия на пути развития. Микроорганизмы 8 , 1222. https://doi.org/10.3390/microorganisms8081222 (2020).

    CAS Статья PubMed Central Google Scholar

  • 4.

    Кассинджер, С. Дж. И ван Хук, М. Л. Архитектура биопленок: новая цель синтетической биологии. Synth. Syst. Biotechnol. 5 , 1–10. https://doi.org/10.1016/j.synbio.2020.01.001 (2020).

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 5.

    Фулаз, С., Витале, С., Куинн, Л., Кейси, Е. Взаимодействие наночастиц и биопленок: роль матрицы EPS. Trends Microbiol. 27 , 915–926. https://doi.org/10.1016/j.tim.2019.07.004 (2019).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 6.

    Flemming, H.C. et al. Биопленки: новая форма бактериальной жизни. Nat. Rev. Microbiol. 14 , 563–575.https://doi.org/10.1038/nrmicro.2016.94 (2016).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 7.

    Ку, Х., Аллан, Р. Н., Хаулин, Р. П., Стодли, П. и Холл-Стодли, Л. Нацеливание на микробные биопленки: текущие и перспективные терапевтические стратегии. Nat. Rev. Microbiol. 15 , 740–755. https://doi.org/10.1038/nrmicro.2017.99 (2017).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 8.

    Theuretzbacher, U., Outterson, K., Engel, A. & Karlen, A. Глобальный доклинический антибактериальный трубопровод. Nat. Rev. Microbiol. 18 , 275–285. https://doi.org/10.1038/s41579-019-0288-0 (2020).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 9.

    Ли, С. Х. и Джун, Б. Х. Наночастицы серебра: синтез и применение в наномедицине. Внутр. J. Mol. Sci. 20 , 865.https://doi.org/10.3390/ijms20040865 (2019).

    CAS Статья PubMed Central Google Scholar

  • 10.

    Дос Сантос Рамос, М.А. et al. Основанные на нанотехнологиях системы доставки лекарств для контроля микробных биопленок: обзор. Внутр. J. Nanomed. 13 , 1179–1213. https://doi.org/10.2147/IJN.S146195 (2018).

    Артикул Google Scholar

  • 11.

    Матур П., Джа С., Рамтеке С. и Джайн Н. К. Фармацевтические аспекты наночастиц серебра. Артиф. Cells Nanomed. Biotechnol. 46 , 115–126. https://doi.org/10.1080/216

    .2017.1414825 (2018).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 12.

    Grun, A. Y. et al. Влияние обработки низкими дозами наночастиц серебра на структуру и состав сообществ пресноводных бактериальных биопленок. PLoS ONE 13 , e0199132. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0199132 (2018).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 13.

    Чжан, X. Ф., Лю, З. Г., Шен, В. и Гурунатан, С. Наночастицы серебра: синтез, характеристика, свойства, применения и терапевтические подходы. Внутр. J. Mol. Sci. 17 , 1534. https://doi.org/10.3390/ijms170 (2016).

    CAS Статья PubMed Central Google Scholar

  • 14.

    Yin, I. X. et al. Антибактериальный механизм наночастиц серебра и его применение в стоматологии. Внутр. J. Nanomed. 15 , 2555–2562. https://doi.org/10.2147/IJN.S246764 (2020).

    CAS Статья Google Scholar

  • 15.

    Singh, P. et al. Эффект антибиопленки наночастиц золота и серебра, синтезированных экстрактами корневища родиолы розовой . Артиф. Cells Nanomed. Biotechnol. 46 , S886 – S899. https://doi.org/10.1080/216

    .2018.1518909 (2018).

    CAS Статья Google Scholar

  • 16.

    Nakamura, S. et al. Синтез и применение наночастиц серебра (НЧ Ag) для профилактики инфекций у медицинских работников. Внутр. J. Mol. Sci. 20 , 3620. https://doi.org/10.3390/ijms20153620 (2019).

    CAS Статья PubMed Central Google Scholar

  • 17.

    Сиддики, К. С., Хусен, А. и Рао, Р. А. К. Обзор биосинтеза наночастиц серебра и их биоцидных свойств. J. Nanobiotechnol. 16 , 14. https://doi.org/10.1186/s12951-018-0334-5 (2018).

    CAS Статья Google Scholar

  • 18.

    Nasrollahzadeh, M., Mahmoudi-Gom Yek, S., Motahharifar, N. & Ghafori Gorab, M. Последние разработки в области опосредованного растениями зеленого синтеза наночастиц на основе Ag для экологических и каталитических применений. Chem. Рек. 19 , 2436–2479. https://doi.org/10.1002/tcr.201800202 (2019).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 19.

    Сингх П., Ким Ю. Дж., Чжан Д. и Янг Д. К.Биологический синтез наночастиц из растений и микроорганизмов. Trends Biotechnol. 34 , 588–599. https://doi.org/10.1016/j.tibtech.2016.02.006 (2016).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 20.

    Сингх, Х., Ду, Дж. И Йи, Т. Х. Зеленый и быстрый синтез наночастиц серебра с использованием экстракта листьев Borago officinalis : противоопухолевое и антибактериальное действие. Артиф.Cells Nanomed. Biotechnol. 45 , 1310–1316. https://doi.org/10.1080/216

    .2016.1228663 (2017).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 21.

    Garibo, D. et al. Зеленый синтез наночастиц серебра с использованием Lysiloma acapulcensis демонстрирует высокую антимикробную активность. Sci. Реп. 10 , 12805. https://doi.org/10.1038/s41598-020-69606-7 (2020).

    ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 22.

    Сингх П., Гарг А., Пандит С., Моккапати В. и Миякович И. Антимикробные эффекты биогенных наночастиц. Наноматериалы 8 , 1009. https://doi.org/10.3390/nano8121009 (2018).

    CAS Статья PubMed Central Google Scholar

  • 23.

    Сингх, Х., Ду, Дж. И Йи, Т. Х. Kinneretia THG-SQI4 опосредованный биосинтез наночастиц серебра и его антимикробная эффективность. Артиф.Cells Nanomed. Biotechnol. 45 , 602–608. https://doi.org/10.3109/216

    .2016.1163718 (2017).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 24.

    Сингх, Х., Ду, Дж., Сингх, П. и Йи, Т. Х. Внеклеточный синтез наночастиц серебра с помощью Pseudomonas sp. THG-LS1.4 и их противомикробное применение. J. Pharm. Анальный. 8 , 258–264. https://doi.org/10.1016/j.jpha.2018.04.004 (2018).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 25.

    Сингх П., Пандит С., Моккапати В., Гарнаес Дж. И Миякович И. Устойчивый подход к зеленому синтезу наночастиц серебра из Solibacillus isronensis sp. и их применение для подавления образования биопленок. Molecules 25 , 2723. https://doi.org/10.3390/molecules25122783 (2020).

    CAS Статья Google Scholar

  • 26.

    Kim, D. H. et al. Flavobacterium panacis sp. nov., выделенный из ризосферы Panax ginseng . Антони Ван Левенгук 109 , 1199–1208. https://doi.org/10.1007/s10482-016-0720-7 (2016).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 27.

    Сингх П., Ким Ю. Дж., Сингх Х., Фарх М. Э. и Янг Д. С. Achromobacter panacis sp. nov., выделенный из ризосферы Panax ginseng . J. Microbiol. 55 , 428–434. https://doi.org/10.1007/s12275-017-6612-3 (2017).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 28.

    Singh, P. et al. Зеленый синтез наночастиц золота и серебра из Cannabis sativa (промышленная конопля) и их способность подавлять образование биопленок. Внутр. J. Nanomed. 13 , 3571–3591. https://doi.org/10.2147/IJN.S157958 (2018).

    CAS Статья Google Scholar

  • 29.

    Вильшефски С. и Бакстер М. Р. Масс-спектрометрия с индуктивно связанной плазмой: Введение в аналитические аспекты. Clin. Biochem. Ред. 40 , 115–133. https://doi.org/10.33176/AACB-19-00024 (2019).

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 30.

    Dalamaga, M. et al. Cedecea lapagei бактериемия, вызванная химическим ожогом, вызванным цементом. Бернс 34 , 1205–1207. https://doi.org/10.1016/j.burns.2007.09.001 (2008).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 31.

    Grimont, P. A. D., Grimont, F., Farmer, J. J. & Asbury, M. A. Cedecea davisae gen. nov., sp. ноя и Cedecea lapagei sp.nov., New Enterobacteriaceae из клинических образцов. Внутр. J. Syst. Evol. Microbiol. 31 , 317–326. https://doi.org/10.1099/00207713-31-3-317 (1981).

    Артикул Google Scholar

  • 32.

    Peretz, A. et al. Редкая бактериемия, вызываемая Cedecea davisae у пациента с хроническим заболеванием почек. г. J. Case Rep. 14 , 216–218. https://doi.org/10.12659/AJCR.889285 (2013).

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 33.

    Loiseau, A. et al. Плазмонные наночастицы на основе серебра и их использование в биосенсорных исследованиях. Биосенсоры (Базель) 9 , 78. https://doi.org/10.3390/bios78 (2019).

    CAS Статья Google Scholar

  • 34.

    Mendis, P. et al. Наносеребро радуга: быстрый и простой метод настройки различных цветов наносеребра посредством контролируемого синтеза стабильных сферических наночастиц серебра. RSC Adv. 6 , 48792–48799. https://doi.org/10.1039/C6RA08336F (2016).

    ADS CAS Статья Google Scholar

  • 35.

    Belteky, P. et al. Наночастицы серебра: поведение агрегации в биорелевантных условиях и его влияние на биологическую активность. Внутр. J. Nanomed. 14 , 667–687. https://doi.org/10.2147/IJN.S185965 (2019).

    CAS Статья Google Scholar

  • 36.

    Puišo, J. et al. Биосинтез наночастиц серебра с использованием соков брусники и клюквы и их антимикробное действие. Colloids Surf. B: Биоинтерфейсы 121 , 214–221. https://doi.org/10.1016/j.colsurfb.2014.05.001 (2014).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 37.

    Guidelli, E.J., Ramos, A.P., Zaniquelli, M.E.D. и Baffa, O. Зеленый синтез наночастиц коллоидного серебра с использованием латекса натурального каучука, экстрагированного из Hevea brasiliensis . Spectrochim. Acta Часть A: Мол. Biomol. Spectrosc. 82 , 140–145. https://doi.org/10.1016/j.saa.2011.07.024 (2011).

    ADS CAS Статья Google Scholar

  • 38.

    Сингх, Х., Ду, Дж., Сингх, П. и Йи, Т.H. Экологичный синтез наночастиц серебра и золота с помощью экстракта листьев Euphrasia officinalis и его биомедицинские применения. Артиф. Cells Nanomed. Biotechnol. 46 , 1163–1170. https://doi.org/10.1080/216

    .2017.1362417 (2018).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 39.

    Плакал Адимуриил Джордж, Б., Кумар, Н., Абрахамсе, Х. и Рэй, С.С. Апоптотическая эффективность многогранных биосинтезированных наночастиц серебра на клетках аденокарциномы человека. Sci. Реп. 8 , 14368. https://doi.org/10.1038/s41598-018-32480-5 (2018).

    ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 40.

    Cheon, J. Y. & Park, W. H. Зеленый синтез наночастиц серебра, стабилизированных белком, вдохновленным мидиями, и колориметрическое определение ионов свинца (II) и меди (II). Внутр. J. Mol. Sci. 17 , 2006 г. https://doi.org/10.3390 / ijms17122006 (2016).

    CAS Статья PubMed Central Google Scholar

  • 41.

    Kumar, S. V. et al. Синтез с высокой степенью конверсии наночастиц серебра, стабилизированного крахмалом, размером <10 нм с использованием микроволновой технологии. Sci. Реп. 8 , 5106. https://doi.org/10.1038/s41598-018-23480-6 (2018).

    ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 42.

    Хатун, Н., Алам, Х., Хан, А., Раза, К. и Сардар, М. Нанообразования ампициллина серебра против бактерий с множественной лекарственной устойчивостью. Sci. Реп. 9 , 6848. https://doi.org/10.1038/s41598-019-43309-0 (2019).

    ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 43.

    Cheon, J. Y., Kim, S. J., Rhee, Y. H., Kwon, O. H. & Park, W. H. Антимикробная активность наночастиц серебра, зависящая от формы. Внутр. J. Nanomed. 14 , 2773–2780. https://doi.org/10.2147/IJN.S196472 (2019).

    CAS Статья Google Scholar

  • 44.

    Хамуда Р. А., Хусейн М. Х., Або-Эльмагд Р. А. и Бавазир С. С. Синтез и биологическая характеристика наночастиц серебра, полученных из цианобактерии Oscillatoria limnetica . Sci. Реп. 9 , 13071. https://doi.org/10.1038/s41598-019-49444-y (2019).

    ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 45.

    Akter, S. & Huq, M.A. Биологически быстрый синтез наночастиц серебра с помощью Sphingobium sp. MAH-11T, их антибактериальная активность и изучение механизмов против лекарственно-устойчивых патогенных микробов. Артиф. Cells Nanomed. Biotechnol. 48 , 672–682. https://doi.org/10.1080/216

    .2020.1730390 (2020).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 46.

    Parvekar, P., Palaskar, J., Metgud, S., Maria, R. & Dutta, S. Минимальная ингибирующая концентрация (MIC) и минимальная бактерицидная концентрация (MBC) наночастиц серебра против Staphylococcus aureus . Biomater. Расследование. Вмятина. 7 , 105–109. https://doi.org/10.1080/26415275.2020.1796674 (2020).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 47.

    Escarcega-Gonzalez, C.E. et al. Противомикробная активность наночастиц серебра in vivo, полученных с помощью зеленого химического синтеза, с использованием Acacia Rigidula в качестве восстанавливающего и укупоривающего агента. Внутр. J. Nanomed. 13 , 2349–2363. https://doi.org/10.2147/IJN.S160605 (2018).

    CAS Статья Google Scholar

  • 48.

    Хонг, Ю. и Браун, Д. Г. Кислотно-основные свойства клеточной поверхности Escherichia coli и Bacillus brevis и изменение в зависимости от фазы роста, источника азота и отношения C: N. Colloids Surf. B: Биоинтерфейсы 50 , 112–119. https://doi.org/10.1016/j.colsurfb.2006.05.001 (2006).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 49.

    Джоши, А. С., Сингх, П. и Миякович, И. Взаимодействие наночастиц золота и серебра с бактериальными биопленками: молекулярные взаимодействия, лежащие в основе ингибирования и сопротивления. Внутр. J. Mol. Sci. 21 , 7658. https://doi.org/10.3390 / ijms21207658 (2020).

    CAS Статья PubMed Central Google Scholar

  • Границы | Активность против Foc RT4 недавно изолированного Streptomyces sp. 5–10 Лекарственное растение (Curculigo capitulata)

    Введение

    Банан — четвертая по величине культура среди развивающихся стран мира (Shen et al., 2019). Фузариозное увядание банана, вызванное Fusarium oxysporum f. sp. cubense (Foc) серьезно тормозит развитие банановой индустрии (Ploetz, 2015).В частности, Foc тропическая раса 4 (Foc TR4) может инфицировать почти все сорта бананов (Ghag et al., 2015). Разрушительное заболевание было обнаружено в основных районах выращивания бананов в тропических и субтропических регионах (Ghag et al., 2015; Ploetz, 2015). До сих пор не существует коммерческих сортов бананов с эффективной устойчивостью к Foc TR4 (Shen et al., 2019). По сравнению с различными стратегиями профилактики, биоконтроль с использованием экологически чистых микробов считается многообещающей стратегией для лечения болезни бананового увядания (Bubici et al., 2019). Несколько отчетов продемонстрировали успешное использование агентов биоконтроля против Foc TR4 (Ho et al., 2014).

    Лекарственные растения и их эндофиты являются важными источниками биологически активных соединений и вторичных метаболитов (Nimnoi et al., 2010). На сегодняшний день только несколько лекарственных растений исследованы на предмет их эндофитного разнообразия и биоактивных метаболитов (Gouda et al., 2016). В частности, эндофитные актиномицеты из лекарственных растений могут продуцировать несколько новых соединений, включая антибактериальные, противогрибковые, противовирусные и противоопухолевые препараты (Ahmad et al., 2017). Эти метаболиты широко применяются в фармацевтической и сельскохозяйственной промышленности (Passari et al., 2015). Предыдущие исследования также показали, что противогрибковые метаболиты из Streptomyces sp. штамм g10 и S. noursei Da07210 проявляли сильную противогрибковую активность против Foc TR4 (Getha et al., 2005; Wu et al., 2009).

    В нашем исследовании Streptomyces sp. 5-10 с высокой антагонистической активностью против Foc TR4 был недавно выделен из лекарственного растения Curculigo capitulata .Его весь геном был секвенирован для выявления некоторых ключевых и новых кластеров генов, связанных с биосинтезом вторичных метаболитов. Для улучшения продукции биоактивных метаболитов штамма 5–10 условия ферментации были оптимизированы с использованием метода поверхности отклика (RSM). После обработки экстрактами штамма 5–10 морфологию и ультраструктуру мицелия Foc TR4 наблюдали с помощью сканирующей электронной микроскопии (SEM) и просвечивающей электронной микроскопии (TEM), соответственно. Следовательно, Streptomyces sp.5–10 будет потенциальным биоресурсом для борьбы с болезнью бананового увядания в будущих приложениях.

    Материалы и методы

    Сбор образцов и выделение эндофитных актиномицетов

    Корни, стебли и листья C. capitulata были собраны в заповеднике «Учжишань» (широта: 18 ° 54′26 ′ ′ северной широты, долгота: 109 ° 40′37 ′ ′ восточной долготы) на острове Хайнань, Китай. Отобранные образцы помещали в стерильные пластиковые пакеты и хранили при 4 ° C.

    Для выделения эндофитных актиномицетов ткани растений стерилизовали и тщательно измельчали ​​в стерильной ступке.Двести микролитров гомогената добавляли в чашку Петри, содержащую 50 мг / л актидиона крахмально-казеинового агара (SCA), антибиотик нистатин, налидиксовую кислоту и дихромат калия (Lee et al., 2014). После инкубации при 28 ° C в течение 30 дней колонии выделяли и идентифицировали в соответствии с морфологическими характеристиками, такими как морфология колоний, цвет и время роста. Эти изоляты хранили при 4 ° C и субкультивировали на агаровой среде с дрожжевым солодовым экстрактом (ISP2) с интервалами 15 дней.

    Фитопатогенные грибы

    Fusarium oxysporum f.sp. cubense tropical race 4 (Foc TR4, ATCC 76255) был сохранен в нашей лаборатории. Модифицированный штамм Foc TR4, сверхэкспрессирующий белок зеленой флуоресценции (Foc-GFP), был предоставлен Китайской академией тропических сельскохозяйственных наук, Хайкоу, Китай. Возбудители культивировали на среде картофельного агара с декстрозой (КПК) при 28 ° C в течение 3-5 дней.

    Скрининг актиномицетов с противогрибковой активностью

    Противогрибковая активность изолятов против Foc TR4 была проанализирована in vitro с использованием метода анализа двойной культуры (Yang et al., 2019). Круглый кусок уже выросшего грибкового агара (диаметром 5 мм) помещали в центр чашки. Круглый кусок уже выращенного агара с актиномицетами (диаметр 5 мм) инокулировали с одной стороны на расстоянии примерно 2,5 см от центра чашки. Грибковый кусочек только Foc TR4 использовали в качестве контроля. Противогрибковую активность регистрировали через 7 дней совместного культивирования при 28 ° C. Диаметр роста Foc TR4 измеряли перекрестным методом (Sadeghian et al., 2016). Степень ингибирования роста мицелия рассчитывали по следующей формуле: (диаметр необработанной колонии — диаметр обработанной колонии) / диаметр необработанной колонии × 100%.

    Морфологические и биохимические характеристики штамма 5–10

    Морфологические, биохимические и физиологические характеристики штамма 5–10 определялись классификационным статусом выбранного штамма актиномицетов (Ahmad et al., 2017). Профили роста были записаны на шести различных средах (Shirling and Gottlieb, 1966). Морфологию изолята определяли с помощью сканирующей электронной микроскопии (SEM, модель S-4800, Hitachi Limited, Япония). После 8 дней роста на среде ISP2 с помощью SEM наблюдали структуру мицелия и поверхность спор.Некоторые показатели, включая гидролиз целлюлозы, крахмала и желатина, образование H 2 S, восстановление нитрата и уреазную активность, измеряли в соответствии с описанием Ширлинга и Готтлиба (1966). Также оценивалось влияние pH (4–10), использования углерода, азота и толерантности к NaCl на рост штаммов (Ahmad et al., 2017).

    Секвенирование генома и функциональная аннотация

    Полный геном выбранного актиномицета секвенировали с использованием платформы Illumina Hiseq × 10 компанией Majorbio Bio-Pharm Technology Co., Ltd, Китай. Библиотека геномной ДНК была создана с помощью набора для подготовки проб ДНК TruSeqTM (Illumina). Чтения были собраны с использованием программного обеспечения SOAP de novo v2.04. Считывания с> 10% Ns и / или 25–35 оснований низкого качества (

    Оптимизация условий ферментации актиномицета

    Проект оптимизации ферментации

    Чтобы получить высокую противогрибковую активность экстрактов актиномицетов, была использована методология поверхности отклика (RSM) для оптимизации условий реакции, включая план Плакетта-Бермана, схему пути наискорейшего подъема и схему Бокса-Бенкена (Кумари). и другие., 2016). Актиномицет инокулировали 100 мл стерилизованной жидкой среды соевых бобов при 28 ° C. Бульон для ферментации экстрагировали этанолом (фильтрат: этанол = 1: 1, об. / Об.). Растворитель удаляли с помощью роторного вакуумного испарителя R 206D (SENCO, Шанхай, Китай). Получали коричневый остаток, который хранили при 4 ° C. Противогрибковую активность определяли методом диффузии в лунках агара.

    Дизайн Плакетта – Бермана

    Набор из 12 экспериментальных прогонов с различными комбинациями независимых переменных был создан с использованием программного обеспечения Design-Expert (версия 10.0, Stat-Ease Inc., Миннеаполис, США). Девять параметров с двумя разными уровнями (-1, 1) включали растворимый крахмал (г / л) ( X 1 ) (20, 25), соевую муку (г / л) ( X 2 ) ( 15, 18,75), дрожжевой экстракт (г / л) ( X 3 ) (5, 6,25), пептон (г / л) ( X 4 ) (2, 2,5), NaCl (г / L) ( X 5 ) (4, 5), начальный pH (X 6 ) (8, 10), время ферментации (д) ( X 7 ) (8, 10), шейкер скорость (об / мин) ( X 8 ) (200, 250) и количество инокуляции (%) ( X 9 ) (6, 7.5). Все эксперименты проводили в трех повторностях. Эксперимент Плакетта – Бермана был разработан в свете полиномиальной модели первого порядка (Surwase et al., 2012):

    Y = β⁢0⁢ + β⁢i⁢x⁢i

    , где Y было ответом, β 0 было пересечением модели, β i было коэффициентом регрессии и X i было уровнем независимой переменной.

    Дизайн «Путь крутого подъема» и дизайн «Бокс – Бенкен»

    На основе приведенных выше результатов, полученных в эксперименте Плакетта-Бермана, длина и направление шага были рассчитаны на траектории самого крутого подъема (Yang et al., 2017). Дизайн Бокса-Бенкена (BBD) был использован для увеличения активной продукции метаболитов и определения оптимального значения значимой переменной (Surwase et al., 2012). NaCl (2,7, 2,9, 3,1 г / л) и количество посева (11,0, 11,9 и 12,8%) были установлены на трех различных уровнях (-1, 0, +1). Для оптимизации этих ключевых факторов было проведено девять экспериментов. Для получения модели наиболее значимого фактора была рассчитана множественная регрессия. Каждый ответ был приспособлен к независимой полиномиальной модели второго порядка (Kumari et al., 2016):

    Y = β⁢0 + β⁢i⁢x⁢i + β⁢ii⁢x⁢i⁢x⁢j + β⁢i⁢j⁢x⁢i⁢x⁢j

    , где Y было противогрибковой активностью (прогнозируемый ответ), x i и X i представляли независимые переменные, β 0 было отрезком, β i был линейным коэффициентом, а β ii был квадратичным коэффициентом члена. Связь между кодированным значением и фактическим значением рассчитывалась следующим образом:

    xi = Xi-Xoδ⁢X

    , где X 0 было естественной переменной в центральной точке, а δX было значением ступенчатого изменения.

    Соответствие данных в уравнении было подтверждено с помощью коэффициента вариации ( R 2 ) в статистическом анализе дисперсии (ANOVA). Подлинность модели оценивалась по прогнозируемому значению для активных метаболитов в оптимизированных условиях (Arora et al., 2015). Статистический анализ данных проводился с использованием программы Design-Expert версии 8.0 (Stat-Ease Inc., Миннеаполис, Миннесота, США) (Arora et al., 2015). Результаты BBD были проверены путем проведения эксперимента в соответствии с предсказанными условиями (Kumari et al., 2016). Все эксперименты проводили в трех повторностях.

    Влияние экстрактов актиномицетов на прорастание спор Foc RT4

    Ингибирующую эффективность экстрактов актиномицетов в отношении прорастания спор Foc TR4 определяли согласно описанию Huang et al. (2011). Равный объем суспензии спор грибов (10 5 КОЕ / мл) и экстрактов актиномицетов смешивали и совместно инкубировали при 28 ° C. Экстракты заменяли стерильной водой и использовали в качестве контроля. После инкубации в течение 6 ч 10 мкл смеси по каплям наносили на стерильное предметное стекло.Среди обнаруженных 200 конидий количество проросших спор подсчитывали с помощью светового микроскопа (модель Axio Scope A1, Carl Zeiss AG, Германия). Процент ингибирования прорастания спор (I) рассчитывали по следующей формуле: I (%) = [(Nc — Nt) / Nc] × 100, где Nc и Nt представляли количество проросших спор в контроле и обработке. группы соответственно (Алиджани и др., 2019). Для каждого лечения выполняли по три повтора.

    Антагонистические эффекты экстрактов актиномицетов на рост мицелия Foc-GFP

    in vitro

    Ингибирующая способность экстрактов к росту мицелия Foc-GFP была обнаружена с использованием модифицированного метода «перекрестной пробки» (Getha et al., 2005). Вкратце, экстракты штаммов 5-10 добавляли к стерилизованному покровному стеклу (1 см × 1 см) с растущим мицелием Foc-GFP. После инкубации при 28 ° C в течение 2–3 дней в темноте образцы мицелия наблюдали с помощью светового микроскопа (модель Axio Scope A1, Carl Zeiss AG, Германия) каждые 2 дня.

    Влияние экстрактов актиномицетов на морфологию мицелия Foc TR4

    экстрактов актиномицетов добавляли к среде PDA с конечной концентрацией 500 мкг / мл. Foc TR4 инокулировали и культивировали на планшете при 28 ° C в течение 5 дней.Планшет без экстрактов использовали в качестве отрицательного контроля. Мицелий Foc TR4 собирали и фиксировали в течение ночи при 4 ° C с помощью 2,5% (об. / Об.) Глутарового альдегида. После двукратного промывания 0,1 моль / л физиологического раствора фосфатного буфера (PBS, pH 7,4) срезы мицелия обезвоживали градиентом раствора этанола (30, 50, 70, 80, 90, 95 и 100%) в течение 20 мин. , а затем этанол заменяли изоамилацетатом. Высушенные образцы покрывали методом золотого покрытия (Xing et al., 2014). Морфологию мицелия Foc TR4 наблюдали с помощью SEM (модель S-4800, Hitachi Limited, Япония).

    Влияние экстрактов актиномицетов на ультраструктуру клеток Foc TR4

    Foc TR4 инокулировали на среду PDA с 500 мкг / мл экстрактов штамма 5–10 при 28 ° C в течение 5 дней. Мицелий Foc TR4 фиксировали глутаральдегидом (2,5%, об. / Об.) В течение ночи при 4 ° C, а затем фиксировали с использованием тетроксида осмия (1%, об. / Об.). После трехкратной промывки PBS (0,1 моль / л, pH 7,0) образцы обезвоживали с помощью различных градиентов раствора этанола и заливали смолой Epon 812 при 37 ° C в течение 12 часов, 45 ° C в течение 12 часов и 60 ° C. ° C в течение 24 ч соответственно (Xing et al., 2014). Мицелий Foc TR4 нарезали ультрамикротомом (Leica, UC6 CM1950, Германия) и окрашивали уранилацетатом и лимонной кислотой в течение 30 мин соответственно. Ультраструктуру поперечного мицелия Foc TR4 выявляли с помощью ПЭМ (JEM-1400 Flash, Hitachi Limited, Япония).

    Влияние экстрактов актиномицетов на утечку клеточного электролита Foc RT4

    Утечку электролита клеток Foc RT4 использовали для оценки эффектов экстрактов актиномицетов на утечку Foc RT4 в клетки в соответствии с описанием Xu et al.(2019). Он был рассчитан по формуле [(J 1 — J 0 / J 2 — J 0 )] × 100%. J 1 представляет значение внеклеточной проводимости через 1, 2, 4, 6, 12 или 24 часа после обработки экстрактом. Значения электропроводности вареных и необработанных образцов были приняты как J 2 и J 0 , соответственно. Электропроводность измеряли с помощью кондуктометра (DDS-307, Hanghai Yueping Scientific Instrument Co. Ltd., Шанхай, Китай).

    Влияние экстрактов актиномицетов на целостность плазматической мембраны Foc RT4

    Иодид пропидия (PI) флуоресцентного красителя, непроницаемого для клеточной мембраны, был применен для исследования целостности плазматической мембраны клеток Foc RT4, обработанных экстрактами актиномицетов (Zhang et al., 2020). Суспензию спор Foc RT4 (1 × 10 5 КОЕ / мл) смешивали с экстрактами различной концентрации (250 мкг / мл, 500 мкг / мл) и совместно инкубировали при 28 ° C в течение 4 ч (Xu et al., 2019). Необработанный образец использовали в качестве контроля.Обработанные клетки дважды промывали PBS, окрашивали PI в течение 5 мин при 28 ° C в темноте и, наконец, детектировали с помощью лазерного конфокального сканирующего микроскопа (корпорация Olympus, FV1000, Токио, Япония).

    Результаты

    Выделение и идентификация актиномицетов с сильной противогрибковой активностью против Foc TR4

    Всего 16 различных эндофитных актиномицетов на основе их противогрибковой активности против Foc TR4 были выделены из различных тканей C. capitulate .Из них 25% этих изолятов показали противогрибковую активность выше 49,25%. В частности, изолят, помеченный 5-10, имел 73,18% скорости ингибирования роста против Foc TR4 (рис. 1A). Напротив, штамм 5-10 может хорошо расти на среде ISP2 или ISP3, и пигмент не наблюдался на всех протестированных средах (дополнительная таблица 1). Спиральная цепь спор и складчатая поверхность спор были обнаружены с помощью SEM (рис. 1B). Физиологические и биохимические характеристики штамма 5–10 оценивали путем анализа различных ферментных продуктов, использования азота и углерода и способности к росту в средах с разным pH (дополнительная таблица 2).Он не только использует целлобиозу, растворимый крахмал, сорбит и мелибиозу в качестве источника углерода, но также использует валин, серин, гистидин и фенилаланин в качестве источника азота. На основании морфологического, биохимического и физиологического анализов штамм 5-10 имеет типичный профиль рода Streptomyces (Williams et al., 1983).

    Рисунок 1. Выделение и идентификация штамма 5–10. (A) Выделение штамма 5–10 с высокой противогрибковой активностью против Fusarium oxysporum f.sp. cubense тропическая гонка 4 (Foc TR4). (B) Морфологические характеристики спор штамма 5–10 с использованием сканирующей электронной микроскопии (СЭМ). (C) Построение филогенетического дерева с использованием последовательностей 16S рРНК из различных Streptomyces .

    Секвенирование генома и аннотация штамма 5–10

    Данные последовательности генома штамма 5–10

    Для оценки производственного потенциала вторичных метаболитов Streptomyces sp.5–10, метод анализа генома оказался эффективным для выявления кластеров биосинтетических генов и прогнозирования биологически активных соединений (Arn et al., 2020). Секвенированный геном штамма 5-10 дал общую пару оснований 1 612 997 704 п.н. После удаления считываний адаптера ПЦР Illumina и считываний низкого качества было получено в общей сложности 4 759 815 считываний пар спаривания (всего 1 433 113 234 п.н.). Размер полного генома составлял 9 528 477 п.н., а содержание G + C составляло 71,63%. Было 273 308 п.н. повторяющихся последовательностей, предсказанных инструментом поиска тандемных повторов.Последовательности штаммов 5–10 депонированы в базе данных GenBank под регистрационным номером JACVYG000000000. Всего было предсказано 9 971 ген с общей длиной 9 528 477 п.н., что составляет 84,62% ​​от всего собранного генома (рис. 2А). Были идентифицированы семьдесят пять генов тРНК и четыре гена рРНК . Последовательность 16S рДНК длиной 1493 п.н. была депонирована в базе данных GenBank NCBI с регистрационным номером MK356358. После филогенетического анализа последовательность 16S рДНК показала высокое сходство с S.albiflaviniger NRRL B-1356 (Рисунок 1C). Однако последовательность генома S. albiflaviniger не была обнаружена в базе данных GenBank, поэтому среднее значение идентичности нуклеотидов (ANI) не может быть рассчитано для оценки генетического родства.

    Рисунок 2. Геномная информация штамма 5–10 и функциональная аннотация предсказанных генов. (A) Геномная карта штамма 5–10 путем секвенирования. (B) COG функциональная классификация. (C) KEGG классификация метаболических путей.

    Функциональная аннотация генома штамма 5–10

    Последовательности кодирующих генов были сопоставлены с базами данных COG и KEGG для прогнозирования предполагаемых функций генов и метаболических путей. Среди них 7155 генов были успешно аннотированы COG (рис. 2B), что составляет 71,76% всех генов. Анализ аннотаций показал, что эти гены в основном участвуют в биосинтезе вторичных метаболитов, транспорте и катаболизме (389 генов), транспорте и метаболизме аминокислот (553 гена), транспорте и метаболизме углеводов (582 гена), производстве и преобразовании энергии (442 гена), транспорт и метаболизм коферментов (181 ген), транспорт и метаболизм липидов (252 гена), трансляция, структура рибосом и биогенез (184 гена), транскрипция (818 генов), механизмы защиты (118 генов) и т. д.В аннотации KEGG указано, что 3174 гена участвуют в метаболизме терпеноидов и поликетидов (112 генов), биосинтезе других вторичных метаболитов (93 гена), биодеградации и метаболизме ксенобиотиков (127 генов), биосинтезе и метаболизме гликанов (67 генов), углеводном метаболизм (412 генов) и метаболизм аминокислот (387 генов) (рис. 2C). Примечательно, что большое количество идентифицированных неизвестных функциональных генов может участвовать в регуляции биосинтеза вторичных метаболитов.

    Кластеры генов вторичного биосинтеза метаболитов

    Всего 60 кластеров генов, ответственных за вторичные метаболиты, были предсказаны с помощью программы Anti-SMASH (дополнительная таблица 3). В частности, 19 кластеров генов показали более 70% сходства с известными последовательностями, включая пять кластеров генов нерибосомальной пептидсинтазы (NRPS), четыре кластера генов, подобных NRPS, шесть кластеров генов поликетидсинтазы (пять PKS-T1 и один PKS. -T2), один кластер генов сидерофоров, два кластера терпеновых генов и один кластер эктоиновых генов (рис. 3А).В частности, другие кластеры генов продемонстрировали 100% сходство с NRPS, включая люмимид Photorhabdus laumondii TTO1, ксенотетрапептид Xenorhabdus nematophila ATCC 19061, бикорнутин A1 Xenorhabdus budapestensis 9000Rubestensis 0004 Parashizdus 80005, HKI 454 и 2-метилизоборнеол S. griseus NBRC 13350). По сравнению с другими геномами Streptomyces , 100% сходства также наблюдалось в двух кластерах терпеновых генов (геосмин Streptomyces coelicolor A3 и пристинол Streptomyces pristinaespiralis ATCC 25486), один кластер генов эктоина 9000 Streptomyces ) и один кластер генов сидерофоров (десфериоксамин B из Streptomyces griseus NBRC 13350).Два кластера генов имели 83% сходства с одним кластером генов PKS-T1 (нигерицин Streptomyces violaceusniger ) и одним кластером генов PKS-T2 (пигмент спор Streptomyces avermitilis ).

    Рисунок 3. Кластеры биосинтетических генов и основные структуры, предсказанные AntiSMASH. (A) Предполагаемые кластеры биосинтетических генов, ответственные за синтез антимикробных соединений. (B) Характеристики основной структуры азаломицина F3a, амипуримицина, нигерицина, пигмента спор и эхозида А в геноме штамма 5–10.

    Основные структуры кластеров биосинтетических генов

    Напротив, предсказанные основные структуры пяти кластеров генов показали более 70% сходства с известными кластерами генов (рис. 3B). Геном штамма 5–10 содержал три потенциальных кластера PKS-T1 (кластер 3, кластер 5 и кластер 27). Кластер 3 имел 78% сходства с ПКС-Т1 из Streptomyces sp. 211726, известный как производство антимикробного азаломицина F3a (Xu et al., 2017). Кластер 15 показал 86% сходства с PKS-T1 из Streptomyces novoguineensis , ответственного за производство антимикробного амипуримицина (Kang et al., 2019). Кластер 27 имел 83% сходства с PKS-T1 из S. violaceusniger , который участвовал в биосинтезе антибактериальных соединений, таких как нигерицин (Harvey et al., 2007). Модуль PKS состоял из домена кетосинтазы (KS), ацилтрансферазы (AT), кеторедуктазы (KR), еноилредуктазы (ER) или дегидратазы (DH). Три кластера ПКС продемонстрировали четкое различие структур ядра. Аналогичные результаты наблюдались также в отношении количества и типа других биосинтетических, транспортных и регуляторных генов (рис. 3B).Эти результаты предполагают, что новые и разнообразные соединения потенциально продуцируются штаммом 5-10. Необходимо провести дальнейшие эксперименты для идентификации кластеров биосинтетических генов, продуцирующих противогрибковые соединения штамма 5–10.

    Оптимизация условий ферментации с помощью RSM

    Определение ключевых факторов среды роста красителя 5–10

    Состав среды и условия культивирования были оптимизированы RSM для улучшения продукции биоактивных метаболитов и обнаружения некоторых важных активных соединений.План Плакетта-Бермана применялся для оценки влияния некоторых факторов роста (таких как растворимый крахмал, соевая мука, дрожжевой экстракт, пептон, NaCl, начальный pH, скорость шейкера, время ферментации и количество посева) на противогрибковую активность штамма 5. –10 (Рисунок 4A и дополнительная таблица 4). Ограниченные переменные и дисперсионный анализ (ANOVA) показаны в дополнительной таблице 5. На основе этих данных было получено следующее уравнение регрессии:

    Рисунок 4. Оптимизация условий ферментации штамма 5–10 с помощью RSM. (A) Дизайн Плакета – Бермана; (В) крутой подъем тропы; (C) дизайн Бокса – Бенкена (BBD). (D) Диагностические графики наблюдаемых и прогнозируемых значений, показывающие надежность модели. (E) Нормальная вероятность внутренних стьюдентизированных остатков. (F) Графики поверхности ответа противогрибковой активности. (G) Контурные графики противогрибковой активности. (H) Сравнение противогрибковой активности до и после оптимизации.

    Y = 35,50917 + 5,36417⁢X1 + 2,99917⁢X2-3,1575⁢X3 + 5,83917⁢X4-8,17583⁢X5 + 0,8575⁢X6 + 4,6625⁢X7 + 3,68917⁢X8 + 10,65083⁢X9

    Определение коэффициента ( R 2 = 97,67%) показало, что уравнение регрессии подходит для прогнозирования противогрибковой активности экстрактов штаммов 5–10 во время ферментации. Тест t и значение p использовали для оценки влияния различных факторов роста на продукцию метаболитов.Напротив, концентрация NaCl и количество посева считались двумя ключевыми факторами ( p < 0,05). Количество инокуляции имело положительную связь с противогрибковой активностью продуктов ферментации, тогда как концентрация NaCl показывала отрицательную зависимость. Таким образом, NaCl и количество посева были выбраны для дальнейшей оптимизации для получения максимальной продукции активных метаболитов.

    Анализ значимых переменных с использованием схемы наискорейшего подъема и схемы Бокса – Бенкена

    Согласно результатам исследования Плакета – Бермана, эти ключевые факторы были дополнительно определены путем наискорейшего восхождения.Наибольшая противогрибковая активность наблюдалась в пятой группе (рис. 4В и дополнительная таблица 6). BBD использовали для определения оптимальных уровней NaCl и количества посева. В соответствии с противогрибковой активностью экстрактов штаммов 5–10 при различных условиях ферментации, уравнение было предсказано следующим образом:

    Y = 71,70-5,92⁢X⁢1-2,92⁢X⁢2-5,13⁢X⁢1⁢X⁢2-10,74⁢X⁢12-9,746⁢X⁢22

    , где Y было противогрибковой активностью, а X 1 и X 2 представляли концентрацию NaCl и количество инокуляции, соответственно.

    Фактические и прогнозируемые значения противогрибковой активности показаны в дополнительной таблице 7 и на рисунке 4C. Прогнозируемые значения соответствовали наблюдаемым значениям в рабочем диапазоне переменных (рис. 4D). Графики остатков и линейные модели отражают нормальность в члене ошибки (рис. 4E) (Wang et al., 2008). Эллиптические контуры показали, что существует значительное взаимодействие между NaCl и количеством инокуляции на трехмерном графике отклика (Фигуры 4F, G).Статистическая значимость была проанализирована для оценки выполнимости уравнения модели (дополнительная таблица 8). На основе p -значения (0,0007), F -значения (164,68), коэффициента детерминации ( R 2 = 0,99903) и коэффициента вариации (1,74%) модель была пригодна для прогнозирования противогрибковых заболеваний. активность экстрактов штамма 5–10 (Surwase et al., 2012). По сравнению с взаимодействием NaCl и количества инокуляции, биномиальные коэффициенты ( X 1 2 и X 2 2 ) уравнения регрессии, очевидно, различались, что позволяет предположить, что влияние этих двух факторов на противогрибковую активность не было простой линейной зависимости.

    Согласно прогнозируемой модели максимальная противогрибковая активность (74,03%) была получена в условиях ферментации с 2,838 г / л NaCl и 11,706% количества инокуляции, а затем был проведен эксперимент для проверки надежности предсказанной модели. . В оптимизированных условиях экстракты штаммов 5-10 имели более высокую противогрибковую активность (72,13%), чем до оптимизации (47,82%) (рис. 4H). Хотя наблюдаемое значение было незначительным отличием от прогнозируемого результата, менее 10% различия можно рассматривать как достоверность модели (Levin et al., 2008). Следовательно, построенная модель была надежной и воспроизводимой в настоящем исследовании.

    Влияние экстрактов штаммов 5–10 на прорастание спор, морфологию мицелия и ультраструктуру Foc TR4

    in vitro Экстракты штамма

    5–10 значительно снизили прорастание спор Foc RT4 по сравнению с 80% проросших спор, обнаруженных через 6 часов в контрольной группе. Только 27,35% скорости прорастания наблюдались после обработки экстрактами штамма 5–10 (дополнительный рисунок 1).Более того, клеточная стенка необработанного Foc TR4 имела линейную и гладкую структуру (рис. 5А). В контрольной группе четко наблюдались интактные митохондрии (M), везикулы (V) и липидные тела в клетках Foc TR4 (рис. 5B). После обработки экстрактами 500 мкг / мл гифы стали сморщенными и разорванными. В матриксе клеток обнаружено большое количество вакуолей и дезинтегрированная цитоплазма. Также была обнаружена явная вакуолизация. Кроме того, Foc TR4, сверхэкспрессирующий ген GFP , использовали для дальнейшего анализа влияния экстрактов на морфологию мицелия с помощью флуоресцентного микроскопа.Большая часть гиф GFP-Foc4 растворилась, и сигналы флуоресценции исчезли (дополнительный рисунок 2). Таким образом, это вмешательство было споростатическим, подавляя образование зародышевых трубок и рост гиф.

    Рис. 5. Влияние экстрактов штамма 5–10 на структурные характеристики Foc TR4. Экстракты штаммов 5–10 смешивали со средой картофельного агара с декстрозой (PDA) и инокулировали при 28 ° C в течение 5 дней. (A) Морфологические характеристики гиф Foc TR4, обработанных 500 мкг / мл экстрактов с помощью SEM.Красные стрелки показывают сморщенные гифы Foc TR4, желтые прямоугольники представляют разорванные гифы Foc TR4, а белые прямоугольники демонстрируют деформированные гифы. (B) Ультраструктура поперечных гиф Foc TR4, обработанных 500 мкг / мл экстрактов с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ТЕМ). М — митохондрии; *, утолщенные и неправильные клеточные стенки; Р — плазмолиз; V — потеря матрикса в везикулах; #, вакуолизация.

    Влияние экстрактов на проницаемость мембран клеток Foc RT4

    Электропроводность клеток Foc TR4 увеличилась на 24 и 29% после обработки 250 и 500 мкг / мл экстрактов –1 в течение 12 часов, соответственно (рис. 6А).Окрашивание PI использовали для дальнейшего определения целостности плазматической мембраны клеток. Как показано на Фигуре 6B, споры Foc TR4 не могут быть окрашены PI, или в контрольной группе наблюдалась низкая красная флуоресценция. В экспериментальной группе наблюдались явные сигналы флуоресценции PI. Наряду с увеличением концентрации экстракта, количество спор с красным сигналом флуоресценции постепенно увеличивалось, что позволяет предположить, что плазматическая мембрана Foc TR4 была серьезно повреждена экстрактами штамма 5-10.

    Рисунок 6. Влияние экстрактов штамма 5–10 на целостность клеточной мембраны Foc TR4. (A) Измерение внеклеточной проводимости Foc TR4 после обработки экстрактами штаммов 5–10. (B) Красный сигнал флуоресценции, показывающий разрушенные плазматические мембраны спор Foc TR4, окрашенных PI. Масштабные линейки = 200 мкм.

    Обсуждение

    Фузариозное увядание банана было распространено в большинстве основных районов выращивания бананов в тропических и субтропических регионах (Ghag et al., 2015; Ploetz, 2015).Некоторые полезные микробы, такие как Trichoderma spp., Pseudomonas spp. И Bacillus spp. использовались для биоконтроля болезни бананового увядания (Bubici et al., 2019). Однако часто наблюдались большие различия в эффективности биоконтроля из-за выбранных микробов (Zhu et al., 2020). До настоящего времени сообщалось об очень небольшом количестве исследований по биоконтролю бананового фузариозного увядания с использованием видов Streptomyces (Bubici et al., 2019; Zhu et al., 2020). В нашем недавнем исследовании эндофитный актиномицет 5-10 с высокой противогрибковой активностью в отношении Foc RT4 был выделен из корней C.capitulata . Предыдущие исследования показали, что актиномицеты из различных лекарственных растений продуцируют больше биоактивных метаболитов, которые могут быть полезны в сельском хозяйстве и медицине (Gouda et al., 2016). Это может быть связано с тем, что метаболиты актиномицетов могут быть связаны с лечебными свойствами растений-хозяев. Например, некоторые соединения, выделенные из C. capitulata , проявляли противоопухолевую и иммуносупрессивную активность (Nie et al., 2013). Некоторые изоляты из рода Streptomyces также были продуктивными продуцентами противомикробных соединений (Seipke et al., 2012). Эти результаты позволяют предположить, что штамм 5–10 будет многообещающим средством биоконтроля против болезни бананового увядания.

    Противогрибковая активность экстрактов штамма 5–10 поддерживалась кластерами генов, ответственными за вторичные метаболиты в геноме штамма 5–10. В геноме штамма 5–10 идентифицированные 60 кластеров биосинтетических генов доказали высокий потенциал образования разнообразных химических соединений. Примечательно, что 47 кластеров генов, кодирующих PKS и NRPS, были идентифицированы на основе функционально активных доменов, которые были важными членами для участия в биосинтезе основных вторичных метаболитов (Moolhuijzen et al., 2020). Распространенность кластеров NRPS и PKS штамма 5–10 отличается от других штаммов Streptomyces . Предыдущие исследования показали, что PKS и NRPS являются большими многофункциональными ферментами с различными каталитическими доменами, которые ответственны за продукцию некоторых активных метаболитов у актиномицетов (Minowa et al., 2007). PKS может использовать различные биодоступные ацилы для построения блоков (например, ацетат, пропионат, бутират и т. Д.) И итеративную декарбоксилированную конденсацию клайзена для создания стереообогащенных ферментно-связанных поликетидных цепей, которые могут быть дополнительно ферментативно адаптированы для получения конечных биоактивных продуктов. (Рива и др., 2014). Мы также обнаружили, что NRPS-подобный эхосид A, принадлежащий к суперсемейству ANL аденилирующих ферментов, участвует в катализе полуреакции частичного аденилирования (Singh et al., 2017). Интересно, что в некоторых идентифицированных кластерах генов NRPS и PKS отсутствовали гомологи в отношении базы данных anti-SMASH. Например, теломицин (BGC0001406) и даптомицин (BGC0000336) продемонстрировали менее 5 и 10% сходства по сравнению с известными функциональными генами. Было высказано предположение, что эти кластеры биосинтетических генов могут привести к производству новых соединений (Siupka et al., 2020).

    Кроме того, в геноме штамма 5–10 были идентифицированы другие биоактивные метаболиты, включая антибиотики, токсины, сидерофоры и иммунодепрессанты, такие как целихелин, ризомид А, меридамицин, амипуримицин, нистатин, азаломицин F3a и т. Д. Михарамицин был нуклеозидом пептидоза. антибиотик, проявляющий замечательную активность против болезни рисового бласта (Kang et al., 2019). Как пептид, хелатирующий трехвалентное железо, целихелин эффективно задействовал собственный клеточный аппарат микроба для улучшения клеточного поглощения и доставки антимикробных соединений (Williams et al., 2019). Нигерицин проявлял сильную антибактериальную и противораковую активность, перемещая ионы натрия и калия, что приводило к изменениям ионного градиента в энергетическом метаболизме (Ortega et al., 2019). Более того, гены, ответственные за биосинтез индола и приобретение ионов в геноме штамма 5-10, также могут играть важную роль в биоконтроле Foc TR4. Предыдущее исследование показало, что индольный скелет проявляет широкий спектр антимикробной биоактивности (Qin et al., 2015). Сидерофоры, продуцируемые Streptomyces , участвовали в ингибировании роста фитопатогенов, лишая некоторых основных ионов (Zhu et al., 2019). На самом деле пути биосинтеза штамма 5–10, который, скорее всего, произошел от Proteobacteria , были более сложными из-за некоторых неизвестных генов биосинтеза и регуляторных генов (Paulus et al., 2017). Большое количество кластеров биосинтетических генов влияет на метаболический потенциал микробов, улучшая конкуренцию за питательные вещества в окружающей среде (Chevrette et al., 2019). Следовательно, Streptomyces sp. 5–10 был отличным кандидатом для биоконтроля фитопатогенных грибов на основе его геномного профиля.

    Биосинтез разнообразных соединений в бактериях тесно связан с условиями ферментации (Bretschneider et al., 2013). Из-за сложного и нелинейного процесса роста микроба незначительное изменение ферментационной среды может значительно повлиять на выход активного соединения и профиль метаболизма (Kaur et al., 2014). В нашем исследовании состав среды и условия культивирования были оптимизированы с помощью RSM. Напротив, двумя ключевыми факторами были NaCl и количество посева. Накопленные данные показали, что соответствующая концентрация NaCl может увеличить производство микробных антибиотиков, опосредуя осмотическое давление среды (Pelczar et al., 1993). Когда осмолярность среды снижалась за счет уменьшения NaCl, штамм 5–10 мог резко стимулировать продукцию вторичных метаболитов. Об этом свидетельствует тот факт, что штамм 5–10, культивированный на среде с 2,84 г / л NaCl, обладал наибольшей противогрибковой активностью (72,13%). Кроме того, в нашем исследовании было подтверждено, что количество инокуляции тесно связано с производством метаболитов. Недостаточное количество инокуляции может привести к низкой биомассе активных метаболитов, тогда как большее количество инокуляции может вызвать накопление токсичных веществ (Wang et al., 2008; Noura et al., 2013). Следовательно, повышение противогрибковой активности ферментационного бульона штамма 5–10 может быть связано с улучшением активных соединений или изменением метаболических профилей в оптимизированной среде. Chiani et al. (2010) улучшили производство микробов биоактивного десфериоксамина В путем небольшого добавления NaCl. Jiang и Huang (2004) сообщили, что увеличение количества инокуляции привело к значительному снижению антимикробного и противогрибкового азамицина. Таким образом, важно улучшить противогрибковую активность экстрактов штаммов 5–10 с помощью короткоциклового и недорогого метода ферментации.

    По сравнению с Streptomyces sp. штамм g10 (Getha et al., 2005) и S. noursei Da07210 (Wu et al., 2009), Streptomyces sp. 5–10 экстрактов снижали прорастание конидий и разрушали структуры мицелия Foc TR4. Это произошло из-за разрыва клеточной мембраны и деградации клеточных стенок. Предыдущее исследование показало, что хитиназа, синтезируемая Streptomyces lydicus WYEC108, может гидролизовать компоненты клеточной стенки грибов in vivo (Mahadevan and Crawford, 1997).Кроме того, дегенерированные клеточные органеллы и большие вакуоли наблюдались в клетках Foc TR4, обработанных экстрактами. Красный сигнал флуоресценции PI заметно усиливался с увеличением количества экстракта, что позволяет предположить, что феномен гибели клеток происходит в большом количестве клеток Foc TR4 (Xu et al., 2019). Это также было подтверждено результатом того, что внеклеточная проводимость грибковых клеток быстро увеличивалась после обработки экстрактами штамма 5–10. Аналогично Streptomyces ma.FS-4 вызывал разрушение плазматической мембраны и апоптоз клеток Foc TR4 (Duan et al., 2020). Фактически, целостность цитоплазматической мембраны является одним из решающих факторов для различных основных функций микробов (Huang et al., 2003). Таким образом, штамм 5-10 может проявлять свою противогрибковую активность против Foc TR4, растворяя клеточную стенку и повреждая цитоплазматическую мембрану и ультраструктуру клетки.

    Заключение

    Штамм Streptomyces sp. 5–10 с высокой противогрибковой активностью Foc TR4 был вновь выделен из корней C.capitulata . Всего в секвенированном геноме штамма 5–10 было предсказано 60 предполагаемых кластеров генов, ответственных за биосинтез антимикробных метаболитов. Некоторые антимикробные гены также были идентифицированы путем сопоставления с базами данных. Кроме того, RSM применяли для оптимизации условий ферментации с целью повышения противогрибковой активности экстрактов штаммов 5–10. Напротив, концентрация NaCl и количество инокуляции считались двумя ключевыми параметрами ферментации. Экстракты штамма 5–10 вызвали сморщенную и разорванную морфологию гиф Foc TR4 и проницаемость мембран.Следовательно, Streptomyces sp. 5–10 будет многообещающим средством биоконтроля против увядания бананов.

    Заявление о доступности данных

    Последовательности штаммов 5–10 были депонированы в базе данных GenBank с регистрационным номером JACVYG000000000 и добавили эту часть содержания в рукопись.

    Авторские взносы

    TY и DZ разработали идеи и разработали экспериментальные планы. JX и JH руководили исследованием. XZ, TJ, YC, DQ, KL, YZ и WT провели несколько экспериментов.TY и MZ проанализировали данные. Рукопись подготовили TY и WW. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

    Финансирование

    Эта работа была поддержана Национальной программой ключевых исследований и разработок (2020YFD1000104), Хайнаньским фондом естественных наук (2019RC293), Китайской системой сельскохозяйственных исследований (CARS-31), Национальной программой ключевых исследований и разработок Китая (2017YFD0202105) , Национальный фонд естественных наук Китая (гранты 31770476) и аспирантский инновационный проект колледжа тропических культур (ZWCX2018008).

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Благодарности

    Мы благодарим Сиянь Чжан, Чжуфэнь Гао, Юаньюань Вэй, Сяоцзюань Ли и Хуйси Чжан за помощь в этой работе.

    Дополнительные материалы

    Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: //www.frontiersin.org / article / 10.3389 / fmicb.2020.610698 / full # additional-material

    Дополнительный рисунок 1 | Эффект Streptomyces sp. 5–10 сырых экстрактов на конидиальном прорастании Foc RT4.

    Дополнительный рисунок 2 | Влияние экстрактов на морфологию мицелия Foc-GFP. (Шкала = 200 мкм).

    Дополнительная таблица 1 | Ростовые характеристики Streptomyces sp. 5–10 на шести носителях.

    Дополнительная таблица 2 | Физиолого-биохимическая характеристика штамма 5–10.

    Дополнительная таблица 3 | Прогнозируемые кластеры генов в геноме штамма 5–10.

    Дополнительная таблица 4 | План Плакетта – Бермана для скрининга значимых переменных условий ферментации Streptomyces sp. 5–10.

    Дополнительная таблица 5 | Анализ данных, полученных с помощью плана Плакетта – Бермана.

    Дополнительная таблица 6 | Экспериментальный дизайн и результаты проектирования пути наискорейшего восхождения.

    Дополнительная таблица 7 | Матрица и данные эксперимента BBD.

    Дополнительная таблица 8 | Результаты дисперсионного анализа уравнения регрессии.

    Сноски

    Список литературы

    Ахмад М.С., Э.И.-Генди, А.О., Ахмед, Р.Р., Хассан, Х.М., Э.И.-Каббани, Х.М., и Мердаш, А.Г. (2017). Изучение антимикробного и противоопухолевого потенциала Streptomyces sp. AGM12-1 выделен из египетской почвы. Фронт. Microbiol. 8: 438. DOI: 10.3389 / fmicb.2017.00438

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Алиджани, З., Амини, Дж., Ашенгроф, М., и Бахрамнеджад, Б. (2019). Противогрибковая активность летучих соединений, продуцируемых штаммом Staphylococcus sciuri MarR44, и их потенциал для биоконтроля Colletotrichum nymphaeae, возбудителя антракноза земляники. Внутр. J. Food Microbiol. 307: 108276.

    Google Scholar

    Арн, Ф., Frasson, D., Kroslakova, I., Rezzonico, F., Pothier, J., Riedl, R., et al. (2020). Выделение и идентификация штаммов актиномицетов из Швейцарии и их биотехнологический потенциал. Chimia Int. J. Chem. 74, 382–390. DOI: 10.2533 / chimia.2020.382

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Арора, Р., Бехера, С., Шарма, Н. К., и Кумар, С. (2015). Новый поиск термотолерантных дрожжей, его характеристика и оптимизация с использованием методологии поверхности отклика для производства этанола. Фронт. Microbiol. 6: 889. DOI: 10.3389 / fmicb.2015.00889

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Bretschneider, T., Heim, J. B., Heine, D., Winkler, R., Busch, B., Kusebauch, B., et al. (2013). Разветвление виниловой цепи катализируется специальным поликетидсинтазным модулем. Природа 502, 124–128. DOI: 10.1038 / природа12588

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Бубич, Г., Каушал, М., Пригигалло, М.И., Гомес-Лама Кабан, К. и Меркадо-Бланко, Дж. (2019). Средства биологической борьбы против фузариозного увядания бананов. Фронт. Microbiol. 10: 616. DOI: 10.3389 / fmicb.2019.00616

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Цао П., Го Д., Лю Дж., Цзян К., Сюй З. и Цюй Л. (2017). Полногеномный анализ выявляет гены, подлежащие положительному отбору, в Pasteurella multocida . Фронт. Microbiol. 8: 961. DOI: 10.3389 / fmicb.2017.00961

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Шеврет, М. Г., Карлсон, К. М., Ортега, Х. Э., Томас, К., Ананьев, Г. Э., и Барнс, К. Дж. (2019). Антимикробный потенциал Streptomyces из микробиомов насекомых. Nat. Commun. 10: 516. DOI: 10.1038 / s41467-019-08438-0

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Чиани М., Акбарзаде А., Фарханги А., Мазинани М., Саффари З., Эмадзаде К. и др.(2010). Оптимизация питательной среды для увеличения продукции десферриоксамина B (десферал) в Streptomyces pilosus . Пакистан J. Biol. Sci. 13, 546–550.

    Google Scholar

    Дуань, Ю., Чен, Дж., Панг, З., Йе, X., Чжан, К., Ху, Х. и др. (2020). Противогрибковый механизм Streptomyces ma. ФС-4 на Фузариозное увядание бананов. J. Appl. Microbiol. 130, 196–207. DOI: 10.1111 / jam.14784

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Гета, К., Викинесвари, С., Вонг, В. Х., Секи, Т., Уорд, А., и Гудфеллоу, М. (2005). Оценка Streptomyces sp. штамм g10 для подавления Fusarium wilt и колонизации ризосферы в ростках бананов, выращиваемых в горшках. J. Ind. Microbiol. Биот. 32, 24–32. DOI: 10,1038 / sj / jim / 7000247

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Гхаг, С. Б., Шехават, У. К. С., Ганапати, Т. Р. (2015). Фузариозное увядание банана: биология, эпидемиология и лечение. Внутр. J. Pest. Manag. 61, 250–263. DOI: 10.1080 / 09670874.2015.1043972

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Гауда, С., Дас, Г., Сен, С. К., Шин, Х. С., и Патра, Дж. К. (2016). Эндофиты: кладезь биологически активных соединений, имеющих лекарственное значение. Фронт. Microbiol. 7: 1538. DOI: 10.3389 / fmicb.2016.01538

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Харви, Б. М., Мироненко, Т., Сун, Ю., Хонг, Х., Дэн, З., Leadlay, P. F., et al. (2007). Понимание биосинтеза полиэфира на основе анализа кластера биосинтетических генов нигерицина у Streptomyces sp. DSM4137. Chem. Биол. 14, 703–714.

    Google Scholar

    Ho, Y.N., Chiang, H.M., Chao, C.P., Su, C.C., Hsu, H.F., Huang, C.C., et al. (2014). При биоконтроле растений, передаваемых через почву, Fusarium увядает бананов через эндофитную бактерию растений, Burkholderia cenocepacia 869T2. Растительная почва 387, 295–306

    Google Scholar

    Хуанг Р., Li, G.Q., Zhang, J., Yang, L., Che, H.J., Jiang, D.H., et al. (2011). Борьба с послеуборочной гнилью плодов Botrytis клубники летучими органическими соединениями Candida intermedia. Фитопатология 101, 859–869.

    Google Scholar

    Хуанг Ю., Сехон Н. С., Борнински Дж., Чен Н. и Рубинский Б. (2003). Мгновенная количественная оценка жизнеспособности отдельных клеток путем электрической оценки целостности клеточной мембраны с помощью микропроцессорных устройств. Sensor Actuat.Phys. 105, 31–39.

    Google Scholar

    Цзян С. и Хуанг В. Ю. (2004). Улучшение условий ферментации азаломицина В, продуцируемого Streptomyes hygroscopicus NND-52. Подбородок. J. Biop. Англ. 2, 53–57.

    Google Scholar

    Кан, В. Дж., Пан, Х. X., Ван, С., Ю, Б., Хуа, Х., и Тан, Г. Л. (2019). Идентификация кластера генов амипуримицина дает представление о биосинтезе сахарных нуклеозидных антибиотиков C9. Org. Lett. 21, 3148–3152.

    Google Scholar

    Каур, Х., Арора, Д. С., Шарма, В. (2014). Выделение, очистка и характеристика противомикробного соединения 6- [1,2-диметил-6- (2-метилаллилокси) гексил] -3- (2-метоксифенил) хромен-4-она из Penicillium sp. HT-28. заявл. Biochem. Биотех. 173, 1963–1976.

    Google Scholar

    Кумари В., Кумар В., Чаухан Р. и Асиф М. (2016). Оптимизация параметров среды с помощью методологии поверхности отклика (RSM) для увеличения продукции кутиназы из Aspergillus sp.RL2Ct. 3 Biotech. 6: 149.

    Google Scholar

    Ли, Л. Х., Зайнал, Н., Азман, А. С., Энг, С. К., Го, Б. Х., Инь, В. Ф. и др. (2014). Разнообразие и антимикробная активность актинобактерий, выделенных из осадков тропических мангровых зарослей Малайзии. Sci. Мир J. 2014: 698178. DOI: 10.1155 / 2014/698178

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Левин, Л., Херрманн, К., Папинутти, В. Л. (2008). Оптимизация продукции лигноцеллюлолитического фермента грибком белой гнили Trametes trogii при твердофазной ферментации с использованием методологии поверхности отклика. Biochem. Англ. J. 39, 207–214. DOI: 10.1016 / j.bej.2007.09.004

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Махадеван Б. и Кроуфорд Д. Л. (1997). Свойства хитиназы противогрибкового средства биоконтроля Streptomyces lydicus WYEC108. Enzyme Microb. Tech. 20, 489–493.

    Google Scholar

    Минова Ю., Араки М. и Канехиса М. (2007). Комплексный анализ отличительных структурных мотивов поликетидов и нерибосомных пептидов, кодируемых в микробных геномах. J. Mol. Биол. 368, 1500–1517. DOI: 10.1016 / j.jmb.2007.02.099

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Moolhuijzen, P. M., Muria-Gonzalez, M. J., Syme, R., Rawlinson, C., See, P. T., Moffat, C. S., et al. (2020). Расширение и сохранение кластеров биосинтетических генов у патогенных Pyrenophora spp. Токсины 12: 242. DOI: 10.3390 / toxins12040242

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Nie, Y., Донг, X., Хе, Ю., Юань, Т., и Хан, Т. (2013). Лекарственные растения рода Curculigo: традиционное использование и фитохимический и этнофармакологический обзор. J. Ethnopharmacol. 147, 547–563. DOI: 10.1016 / j.jep.2013.03.066

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Nimnoi, P., Pongsilp, N., and Lumyong, S. (2010). Эндофитные актиномицеты, выделенные из Aquilariacrassna Pierre ex Lec, и скрининг продукции стимуляторов роста растений. Мир J.Microb. Биот. 26, 193–203.

    Google Scholar

    Нура, А. Н., Ашраф, А. Б., и Нура, С. Н. (2013). Производство антимикробного агента, ингибирующего некоторые патогенные человеческие бактерии с множественной лекарственной устойчивостью и Candida albicans , с помощью Streptomyces sp. NEAE-1. Внутр. J. Pharmacol. 9, 335–347.

    Google Scholar

    Олано К., Гарсия И., Гонсалес А., Родригес М., Розас Д., Рубио Дж. И др. (2014). Активация и идентификация пяти кластеров вторичных метаболитов в Streptomyces albus J1074. Microb. Biotechnol. 7, 242–256. DOI: 10.1111 / 1751-7915.12116

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ортега, Х. Э., Феррейра, Л. Л. Г., Мело, В. Г. П., Оливейра, А. Л. Л., Рамос, А., Лопес, Н. П. и др. (2019). Противогрибковые соединения Streptomyces, связанные с муравьями аттинов, также подавляют Leishmania donovani . PLoS Negl. Троп. Дис. 13: e0007643. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0007643

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Пассари, А.К., Мишра, В. К., Сайкия, Р., Гупта, В. К., и Сингх, Б. П. (2015). Выделение, численность и филогенетическая принадлежность эндофитных актиномицетов, связанных с лекарственными растениями, и скрининг их антимикробного биосинтетического потенциала in vitro. Фронт. Microbiol. 6: 273. DOI: 10.3389 / fmicb.2015.00273

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Паулюс К., Ребец Ю., Токовенко Б., Надмид С., Терехова Л. П., Мироновский М. и др. (2017).Новые натуральные продукты, идентифицированные комбинированным геномно-метаболомным профилированием морских Streptomyces sp. MP131-18. Sci. Реп. 7: 42382. DOI: 10.1038 / srep42382

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Paungfoolonhienne, C., Lonhienne, T. G., Yeoh, Y. K., Webb, R. I., Lakshmanan, P., Chan, C. X., et al. (2014). Новый вид Burkholderia, выделенный из корней сахарного тростника, способствует росту растений. Microb. Biotechnol. 7, 142–154. DOI: 10.1111 / 1751-7915.12105

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Pelczar, M.J., Chan, E.C.S, and Krieg, N.R. (1993). Микробиология: концепции и приложения. Нью-Йорк, Нью-Йорк: Макгроу-Хилл.

    Google Scholar

    Плётц Р. К. (2015). Управление фузариозным увяданием банана: обзор с особым акцентом на тропическую расу 4. Crop. Prot. 73, 7–15. DOI: 10.1016 / j.cropro.2015.01.007

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Цинь, X.J., Zhao, Y. L., Lunga, P. K., Yang, X. W., Song, C. W., Cheng, G. G., et al. (2015). Индольные алкалоиды с антибактериальной активностью из водной фракции Alstonia scholaris . Тетраэдр 71, 4372–4378. DOI: 10.1016 / j.tet.2015.04.046

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Рива, Э., Вилкенинг, И., Газзола, С., Ли, У. М. А., Смит, Л., Лидли, П. Ф. и др. (2014). Химические зонды для функционализации поликетидных промежуточных продуктов. Angew.Chem. 126, 12138–12143. DOI: 10.1002 / ange.201407448

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Садегян М., Бонжар, Г. Х. С., Сирчи, Г. Р. С. (2016). Послеуборочная биологическая борьба с горькой гнилью яблони почвенными актиномицетами и молекулярная идентификация активного антагониста. Послеуборочная биол. Tec. 112, 46–54. DOI: 10.1016 / j.postharvbio.2015.09.035

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Сейпке, Р. Ф., Кальтенпот, М., и Хатчингс М.И. (2012). Симбионты Streptomycesas: новая и широко распространенная тема? FEMS. Microbiol. Ред. 36, 862–876.

    Google Scholar

    Шен, З., Ван, Б., Чжу, Дж., Ху, Х., Тао, К., Оу, Ю. и др. (2019). Фумигация извести и карбоната аммония в сочетании с внесением биоорганических удобрений управляла ризосферой банана, чтобы создать уникальный микробиом против панамской болезни. Microb. Biotechnol. 12, 515–527. DOI: 10.1111 / 1751-7915.13391

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ширлинг, Э.Б. и Готтлиб Д. (1966). Методы характеристики видов Streptomyces. Внутр. J. Syst. Бактериол. 16, 313–340.

    Google Scholar

    Сингх М., Чаудхари С. и Сарин Д. (2017). Нерибосомные пептидные синтетазы: идентификация криптических кластеров генов и расшифровка натурального продукта. J. Biosci. 42, 175–187.

    Google Scholar

    Siupka, P., Pinski, S.A., Babicka, D., and Piotrowska-Seget, Z. (2020). Анализ генома выявил высокий биосинтетический потенциал противогрибкового Streptomyces sp.С-2 изолирован от черной сажи. Внутр. J. Mol. Sci. 21: 2558. DOI: 10.3390 / ijms21072558

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Сурвасе, С. Н., Патил, С. А., Джадхав, С. Б., и Джадхав, Дж. П. (2012). Оптимизация производства I-DOPA компанией Brevundimonas sp. SGJ с использованием методологии поверхности отклика. Microb. Biotechnol. 5, 731–737.

    Google Scholar

    Ван, Ю. Х., Фэн, Дж. Т., Чжан, К., и Чжан, X. (2008). Оптимизация условий ферментации для производства антибиотиков Xenorhabdus nematophila с помощью методологии поверхности отклика. J. Appl. Microbiol. 104, 735–744.

    Google Scholar

    Уильямс, Дж. К., Шелдон, Дж. Р., Имлай, Х. Д., Даттер, Б. Ф., Драелос, М. М., Скаар, Э. П. и др. (2019). Синтез сидерофоров целихелин и его использование в качестве зонда при изучении чувствительности и реакции бактерий на металлы. Org. Lett. 21, 679–682.

    Google Scholar

    Уильямс, С. Т., Гудфеллоу, М., Олдерсон, Г., Веллингтон, Э. М. Х., Снит, П. Х. А., и Саккин, М.Дж. (1983). Численная классификация Streptomyces и родственных родов. Микробиология 129, 1743–1813.

    Google Scholar

    Wu, X., Huang, H., Chen, G., Sun, Q., Peng, J., Zhu, J., et al. (2009). Новый антибиотик, производимый Streptomyces noursei Da07210. Антони Ван леувенгук 96, 109–112.

    Google Scholar

    Xing, F., Hua, H., Selvaraj, H., Selvaraj, J. N., Zhao, Y., Zhou, L., Liu, X., et al. (2014). Подавление роста и морфологические изменения Fusarium verticillioides под действием коричного масла и коричного альдегида. Контроль пищевых продуктов. 46, 343–350

    Google Scholar

    Xu, T., Cao, L., Zeng, J., Franco, C. M. M., Yang, Y., Hu, X., et al. (2019). Режим противогрибкового действия эндофита риса Streptomyces hygroscopicus OsiSh-2 как потенциального средства биоконтроля против возбудителя рисового бласта. Пестик. Biochem. Phys. 160, 58–69.

    Google Scholar

    Xu, W., Zhai, G., Liu, Y., Li, Y., Shi, Y., Hong, K., et al. (2017). Итерационный модуль в поликетидсинтазе азаломицин F содержит переключаемый еноилредуктазный домен. Angew. Chem. 56, 5503–5506.

    Google Scholar

    Ян, X., Сяо, X., Лю, Д., Ву, Р., Ву, К., и Чжан, Дж. (2017). Оптимизация продукции коллагеназы Pseudoalteromonas sp. SJN2 и применение коллагеназ при получении антиоксидантных гидролизатов. Мар. Наркотики 15: 377

    Google Scholar

    Янг, Ю., Чжан, С., и Ли, К. (2019). Антагонистическая активность и механизм изолированного окрашивания Streptomyces corchorusii AUH-1 против фитопатогенных грибов. World J. Microb. Биот. 35: 145.

    Google Scholar

    Zhang, M., Li, Y., Bi, Y., Wang, T., Dong, Y., Yang, Q., et al. (2020). 2-Фенилэтилизотиоцианат оказывает противогрибковое действие против Alternaria alternata , влияя на целостность мембран и выработку микотоксинов. Токсины 12: 124.

    Google Scholar

    Чжу Л., Лю Н., Ван Х., Чжан З., Цзян Л. и Хуанг Х. (2019). Проект последовательности генома Bacillus velezensis C4341, продуцирующего широкий спектр противогрибковых препаратов, выделенного из образца солончаковой почвы в Китае. J. Glob. Противомикробный. Сопротивляться. 16, 291–293.

    Google Scholar

    Чжу, З., Тиан, З., и Ли, Дж. (2020). Штамм Streptomyces morookaensis способствует росту растений и подавляет фузариозного увядания банана. Троп. Завод Патол. 9: 00396. DOI: 10.1007 / s40858-020-00396-z

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    границ | Зеленый синтез AuNP с помощью Acinetobacter sp. GWRVA25: Оптимизация, характеристика и его антиоксидантная активность

    Введение

    Биологические методы синтеза наночастиц экологически безопасны с простыми процессами масштабирования (Макаров и др., 2014). Сообщается, что различные биологические системы, такие как растения, грибы, бактерии, биомолекулы и т. Д., Синтезируют наночастицы (Ghosh et al., 2012; Singh et al., 2013; Shedbalkar et al., 2014; Wadhwani et al., 2014, 2018). ; Yuan et al., 2017; Molnár et al., 2018; Onitsuka et al., 2019). Бактериальная система выгодна по сравнению с другими при производстве индивидуальных наночастиц за счет управления физико-химическими параметрами. Acinetobacter широко распространен в природе с высокой выживаемостью (Towner and Chopade, 1987; Shakibaie et al., 1999; Саху и др., 2012; Fulsundar et al., 2014, 2015; Wong et al., 2017). Он встречается в различных средах, таких как почва ризосферы, больницы, сточные воды, на коже человека или животных, в продуктах питания и т. Д. (Patil et al., 2001; Saha and Chopade, 2002; Yavankar et al., 2007; Chopade et al. ., 2008; Jagtap et al., 2009; Sachdev et al., 2010; Farokh et al., 2011; Pour et al., 2011; Yele et al., 2012; Mujumdar et al., 2014; Wadhwani et al. , 2014; Jagtap, Chopade, 2015). Он может выдерживать экстремальные условия, такие как высокие антибиотики, радиация, высыхание и соли металлов (Deshpande and Chopade, 1994; Dhakephalkar and Chopade, 1994; Shakibaie et al., 1998; Fulsundar et al., 2014, 2015). Сообщается, что Acinetobacter синтезирует различные металлические наночастицы, а именно. серебро, платина и золото (Gaidhani et al., 2013, 2014; Singh et al., 2013, 2015, 2018; Wadhwani et al., 2014). Acinetobacter spp. изолированы из сточных вод, обладают способностью синтезировать полиэдрические наночастицы золота при оптимизации физико-химических параметров (Wadhwani et al., 2014). Ввиду этого Acinetobacter группа микроорганизмов отлично подходит для синтеза AuNP.Чтобы получить монодисперсные наночастицы с помощью бактериальной системы, необходимо оптимизировать их синтез, контролируя физико-химическую среду (Gaidhani et al., 2013; Wadhwani et al., 2014; Singh et al., 2015; Nadhe et al., 2019). Можно получить наночастицы желаемой формы и размера, поддерживая возраст культуры, плотность клеток, pH, концентрацию соли металла и температуру (Wadhwani et al., 2014).

    Применение наночастиц сильно зависит от их свойств, которые контролируются размером и формой (Huang and El-Sayed, 2010; Ghosh et al., 2015а; Гош и Джини Чако, 2016). AuNP находят огромное применение в медицине, например, для лечения сахарного диабета, рака, сердечно-сосудистых заболеваний, а также для контроля множественной устойчивости к антибиотикам у патогенов человека в качестве новых наноантибиотиков против туберкулеза (Giljohann et al., 2010; Kitture et al., 2012; Ghosh et al., 2014, 2015c; Mallick et al., 2015; Singh et al., 2016; Wadhwani et al., 2017). Антиоксидантные свойства наночастиц — одно из наиболее важных применений в терапии и биомедицине (Kitture et al., 2014; Салунке и др., 2014; Гош и др., 2015b; Гош и Джини Чако, 2016). Активные формы кислорода (АФК) образуются в результате клеточного метаболизма, приводящего к окислительному стрессу. Этот стресс вызывает повреждение ДНК, белков и липидов, что в конечном итоге приводит к старению и смерти клеток. Более того, уровни АФК внутри клетки также препятствуют процессу передачи сигналов в клетке, ответственного за замедленную пролиферацию клеток, что является наиболее важным фактором рака (Schieber and Chandel, 2014). Потребление антиоксидантов в качестве пищевых добавок помогло людям бороться с такими расстройствами, как рак, сердечно-сосудистые заболевания и старение (Watters et al., 2007; Bjelakovic et al., 2014). AuNPs, синтезируемые химическим, физическим и биологическим путями, обладают антиоксидантной активностью (Якимович и др., 2008; Medhe et al., 2014; Madhanraj et al., 2017). Сообщений об антиоксидантных свойствах AuNP, синтезируемых микроорганизмами, очень мало (Ahmad et al., 2003; Veeraapandian et al., 2012; Manivasagan et al., 2015; Markus et al., 2016). Однако нет сообщений об антиоксидантных свойствах AuNP, синтезированных Acinetobacter sp. Поэтому мы выдвинули гипотезу о том, что оптимизация физико-химических параметров может влиять на морфологию AuNPs, синтезированных с использованием Acinetobacter sp.изолированы от ризосферы пшеницы и помогают в получении монодисперсных наночастиц желаемой формы и размера. Также оптимизированные AuNP могут проявлять антиоксидантную активность.

    Материалы и методология

    Химические вещества

    HAuCl 4 , гидроксид натрия (NaOH) и соляная кислота (HCl) были приобретены в SRL, Мумбаи, Индия. Бульон Лурии Бертани (LB), 2,2-дифенил-2-пикрилгидразил (DPPH), нитропруссид натрия, пероксид водорода (H 2 O 2 ) сульфаниламид и нафтиламин были закуплены в HiMedia, Мумбаи, Индия.От одного до десяти фенантролин был приобретен в Merck, Mumbai, India.

    Используемые культуры и условия роста

    Четырнадцать культур Acinetobacter spp. выделенные из ризосферы пшеницы и идентифицированные секвенированием 16S рРНК (инвентарный номер NCBI — EU7, EU9-EU4, EU8, EU0-EU2, EU221350, EU221386, EU221389), были отобраны для скрининга (Sachdev et al., 2010). Все культуры выращивали в течение ночи в бульоне LB при 30 ° C, 150 об / мин и хранили в виде глицерина при -80 ° C.

    Скрининг культур для синтеза AuNP

    Для предварительного скрининга 18-часовые культуры (10 мл) центрифугировали при 8000 об / мин в течение 10 минут при 4 ° C. Осадок клеток собирали и трижды промывали и, наконец, суспендировали в стерильной воде milli-Q. HAuCl 4 добавляли к суспензии до конечной концентрации 1 мМ и инкубировали при 30 ° C. Суспензию проверяли на синтез AuNP через регулярные промежутки времени, регистрируя ее УФ-видимый спектр между 200 и 800 нм. Суспензию клеток и 1 мМ раствор HAuCl 4 использовали в качестве контроля.Культура, показывающая наивысший характеристический пик (от 500 до 560 нм) присутствия AuNP, была выбрана для дальнейших экспериментов.

    Оптимизация синтеза AuNP

    Для получения монодисперсных наночастиц оптимизированы физико-химические параметры методом однофакторной оптимизации. Прежде всего, возраст культуры был оптимизирован путем воздействия на культуры, выращенные в течение 6, 12, 18, 24, 48, 72 и 96 часов, 1 мМ соли HAuCl 4 при 30 ° C. Плотность клеток оптимизированной возрастной культуры доводили до <0.3, 0,3, 0,6, 0,9, 1,2, 1,5, 1,8, 2,1, 2,4, 2,7 и 3 × 10 9 КОЕ / мл согласно стандартам МакФарланда и позволяли реагировать при 30 ° C с 1 мМ HAuCl 4 . Чтобы проверить влияние концентрации соли на синтез AuNP, культуру с отрегулированным OD объединяли с различными концентрациями HAuCl 4 от 0,1 до 4 мМ. Кроме того, pH реакционной смеси регулировали с помощью 0,1 N HCl и NaOH в диапазоне от 2 до 10 для получения оптимизированного значения pH, а затем проверяли оптимизированными концентрациями HAuCl 4 .Кроме того, оптимизацию температуры проводили путем инкубации реакционной смеси при различных температурах, таких как 8, 20, 30, 37, 50, 60 ° C. УФ-видимые спектры (200–800 нм) использовали для контроля реакции на максимальный и монодисперсный синтез AuNPs. Более того, просвечивающий электронный микроскоп (ТЕМ) Technai G2, 20 ultra-win FEI, Нидерланды, использовался для мониторинга формы и размера AuNP для получения монодисперсных частиц.

    Характеристика AuNP

    В зависимости от расположения наночастиц был выбран курс действий для разделения наночастиц.Наночастицы отделяли от клеточного осадка центрифугированием при 8000 об / мин в течение 7 мин. Отделенный осадок клеток ресуспендировали в равном объеме воды milli-Q и подвергали обработке ультразвуком с амплитудой 25% в течение 30 циклов включения и 10 секунд на льду в течение 30 минут. Снова клеточный дебрис отделяли центрифугированием при 8000 об / мин в течение 7 минут. наночастицы из супернатанта концентрировали центрифугированием при 12000 об / мин при 4 ° C в течение 20 мин. Дополнительные наночастицы дважды промывали стерильной водой milli-Q и собирали центрифугированием при 12000 об / мин при 4 ° C в течение 20 мин.Гранулы наночастиц восстанавливали в 5 мл воды milli-Q.

    Наночастицы были охарактеризованы с использованием нескольких методов. Тонкую пленку AuNP наносили на предметное стекло и анализировали на дифрактограмму рентгеновских лучей с использованием рентгеновского дифрактометра D8 Advanced Brucker. Для сканирующей электронной микроскопии каплю наносили слоем на кусок стекла размером 0,5 × 0,5 см и сушили на воздухе при комнатной температуре (RT). Стеклянный кусок был покрыт платиной с помощью устройства для нанесения покрытия распылением и проанализирован с помощью автоэмиссионного сканирующего электронного микроскопа (FESEM), FEI Nova NanoSEM 450.Размер, форму и рисунок полос AuNP определяли с помощью ТЕМ, Technai G2, 20 ultra-win FEI, Нидерланды. Каплю наночастиц, нанесенных на медную сетку, использовали для ПЭМ-анализа. Элементное содержание наночастиц определяли методом энергодисперсионной спектроскопии (EDS) с помощью энергодисперсионного рентгеновского спектрофотометра (JED-2300; JEOL) с помощью ПЭМ. Кроме того, с использованием той же сетки была исследована дифракция электронов в выбранной области (SAED). Осадок клеток, используемый для синтеза AuNP и синтезированных AuNP, сушили на воздухе и записывали FTIR-спектр от 380 до 4000 см -1 при разрешении 2 см -1 с использованием спектрофотометра Bruker Tenor 37 FTIR.Разбавленный раствор AuNPs подвергали анализу распределения частиц по размерам и дзета-потенциала с использованием технологии динамического светорассеяния (DLS) с помощью дзетазизатора (Nano-ZS90, Malvern, UK).

    Антиоксидантная активность AuNP

    Анализ очистки DPPH

    Синтезированные наночастицы отделяли от клеток обработкой ультразвуком и центрифугировали при 6000 об / мин в течение 5 минут, чтобы избавиться от клеточных остатков. Антиоксидантная активность AuNP (25–150 мкг) изучалась по способности улавливать свободные радикалы из DPPH (Medhe et al., 2014). Различные концентрации AuNPs смешивают с этанольным DPPH и инкубируют в течение 30 мин в темноте. Проявленный продукт считывали спектрофотометрически при 517 нм. Только вода оставалась чистой. Процент поглощающей активности рассчитывали по следующей формуле:

    Процент поглощающей активности (%) = ABlank- ASampleABlank × 100

    Где, A Бланк = поглощение бланка

    A Образец = поглощение образца

    Эксперимент был проведен в трех экземплярах, и значение выражено как среднее ± с.d.

    Оксид азота (NO
    ) Анализ очистки

    Для анализа поглощения оксида азота 1 мл различных концентраций AuNP (25–150 мкг / мл) сначала смешивали с 0,5 мл нитропруссида натрия (1 мМ), приготовленного в фосфатном буферном солевом растворе (PBS). Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 180 мин с последующим добавлением равного количества реагента Грисса (1% сульфаниламида и 0,1% нафтиламина, приготовленные отдельно в 2,5% фосфорной кислоте и смешанные вместе). Проявленный окрашенный продукт считывали спектрофотометрически при 542 нм.В качестве контроля использовали только буфер PBS, а в качестве стандарта — аскорбиновую кислоту (Boora et al., 2014). Процентную активность по улавливанию NO рассчитывали по указанной выше формуле. Эксперимент проводили в трех экземплярах, и значение выражалось как среднее ± стандартное отклонение.

    H
    2 O 2 Анализ продувки

    В этом анализе различные концентрации 1,5 мл AuNP (25–150 мкг / мл) сначала смешивали с 0,25 мл сульфата железа (2) аммония (1 мМ). К этой смеси добавляли 0,0625 мл 5 мМ раствора H 2 O 2 и инкубировали в течение 5 минут в темноте при комнатной температуре.После инкубации в каждую пробирку добавляли 1 мМ 1,10-фенантролин и инкубировали при комнатной температуре в течение 10 мин. Все пробирки считывали при 510 нм с помощью спектрофотометра. Контрольный раствор содержал только воду, сульфат двухвалентного аммония и 1,10-фенантролин. Аскорбиновая кислота сохраняется как стандарт антиоксиданта (Mukhopadhyay et al., 2016). Активность по улавливанию H 2 O 2 рассчитывали по формуле, упомянутой выше. Эксперимент проводили в трех экземплярах, и значение выражалось как среднее ± стандартное отклонение.

    Результаты и обсуждение

    Скрининг синтеза AuNP

    Все изоляты Acinetobacter spp. скрининг на синтез AuNPs, показал положительный результат, когда клеточную суспензию провоцировали 1 мМ HAuCl 4 (рис. 1). Acinetobacter spp. Известно, что изолированные из ризосферы синтезируют наночастицы серебра и платины (Gaidhani et al., 2013; Singh et al., 2013). Однако это первое сообщение о синтезе AuNP с использованием биомассы Acinetobacter spp., обладающий свойствами стимулирования роста растений, выделенный из почвы ризосферы пшеницы (Sachdev et al., 2010). Имеется отчет о синтезе AuNP с использованием Acinetobacter sp. SW30, который был выделен из активированного ила сточных вод (Wadhwani et al., 2014). Позже Wadhwani et al. (2018) предположили, что фермент лигнинпероксидаза, присутствующий в Acinetobacter sp. SW30 участвует в восстановлении HAuCl 4 до сферических AuNP. При анализе УФ-видимого спектра пик поверхностного плазмонного резонанса (ППР) наблюдался при 550 нм, что является характерным пиком для синтеза AuNP (рис. 1). Acinetobacter sp. GWRVA25 дает максимальный синтез AuNP с наивысшим пиком при 550 нм с изменением цвета на пурпурный. ППР проявляется AuNP из-за колебаний свободных электронов при падении светом определенной длины волны. В случае AuNP наблюдается изменение цвета от желтого до красного и в некоторых случаях от розовато-лилового до фиолетового, в зависимости от размера и формы наночастиц. Зеленый цвет также наблюдался в случае палочковидных наночастиц (Murphy et al., 2008). Различное изменение цвета наночастиц происходит из-за поглощения и излучения определенной длины волны, которая находится в видимой области электромагнитного спектра (Murphy et al., 2008; Zhang et al., 2016). Культура Acinetobacter sp. GWRVA25 (регистрационный номер NCBI EU1) был депонирован в Коллекции микробных культур (MCC), Национальный центр клеточных наук, Пуна, Индия. Регистрационный номер MCC для культуры — MCC 3368.

    Рисунок 1 . Скрининг 14 изолятов Acinetobacter spp. для синтеза AuNP.

    Оптимизация синтеза AuNP

    В случае бактериогенного синтеза наночастиц форма и размер наночастиц могут контролироваться путем оптимизации физико-химических параметров (Singh et al., 2013, 2015; Wadhwani et al., 2014). Это предпочтительный процесс по сравнению с другими видами биогенного и химического или физического синтеза наночастиц. Во время оптимизации возраста культуры максимальный синтез AuNP наблюдался как в 72-, так и в 96-часовой культурах, выращенных с 1 мМ HAuCl 4 (рис. 2А). Когда плотность клеток 72-часовой культуры была скорректирована с 0,3 × 10 9 до 3 × 10 9 КОЕ / мл, самый высокий синтез наблюдался при 2,4 × 10 9 КОЕ / мл (рис. 2В). Это может быть связано с количеством биомолекул, необходимых для синтеза AuNP, присутствующих в 2.4 × 10 9 Плотность КОЕ / мл. Более того, биомолекулы, необходимые для синтеза AuNP, могут находиться в поздней стационарной фазе в максимальном количестве. При синтезе наночастиц с использованием Acinetobacter sp. возраст культуры варьируется в зависимости от сорта. В отличие от нашего результата, для синтеза AuNP с использованием Acinetobacter sp. SW30, оптимальный возраст — 24 часа, культура поздней логарифмической фазы (Wadhwani et al., 2014).

    Рисунок 2 . Оптимизация физико-химических параметров синтеза AuNPs. (A) Возраст культуры, (B) плотность клеток, (C) концентрация соли, (D) pH и (E) температура.

    Кроме того, показано, что концентрация HAuCl 4 влияет на форму и размер наночастиц (He et al., 2008). По данным анализа УФ-видимого спектра самый высокий синтез наблюдался с 1 мМ HAuCl 4 (рис. 2C). Однако, когда эти частицы визуализировались с помощью ПЭМ (рис. 3А), было обнаружено, что частицы являются полидисперсными с различными формами, такими как треугольники, сферы и многогранники.По сравнению с 1 мМ частицы, образованные при концентрации соли 0,5 мМ, были более монодисперсными, сферическими с размером 15 ± 10 нм (рис. 3В). кроме того, наблюдался сдвиг в синий цвет в УФ-видимом спектре от 550 до 540 нм, указывающий на образование более мелких частиц при концентрации 0,5 мМ HAuCl 4 (рис. 2С). Rhodopseudomonas capsulate сообщается о синтезе небольших и однородных наночастиц сферической формы при низких концентрациях HAuCl 4 (0,25 мМ). По мере увеличения концентрации (0.3–0,5 мМ), размер наночастиц увеличивался, и образование нанопроволок наблюдалось как промежуточный продукт. Относительная концентрация восстанавливающих белков по отношению к ионам золота влияет на термодинамический контроль как зарождения, так и роста образования наночастиц (He et al., 2008). Подобные наблюдения были отмечены Wadhwani et al. (2014) в случае синтеза AuNP с использованием Acinetobacter sp. SW30.

    Рисунок 3 . Просвечивающая электронная микроскопия для синтеза AuNP с использованием (A, B) 1 и 0.5 мМ HAuCl 4 соответственно, (C, D) при 37 и 50 ° C, (E), увеличенное изображение оптимизированных AuNP и (F) решетка и полосы на AuNP.

    pH реакции очень хорошо влияет на форму частиц. В нашем исследовании было обнаружено, что pH 7 является наиболее подходящим для синтеза AuNPs (рис. 2D). Другое исследование Wadhwani et al. (2014) показали образование полиэдрических наночастиц размером 20-10 нм при pH-9. Напротив, синтез AuNPs с использованием Verticillium luteoalbum предпочтителен при кислом pH, который является внутриклеточным (Gericke and Pinches, 2006).Также было замечено, что щелочной pH способствует внеклеточному синтезу наночастиц, имеющих полиэдрическую форму (Wadhwani et al., 2014). Реакцию дополнительно оптимизировали, инкубируя реакционную смесь при различных температурах. Анализ УФ-видимого спектра (рис. 2E) показал, что температура 37 ° C была наиболее подходящей температурой для синтеза AuNP. Температура реакции является одним из важных факторов в синтезе нанозолота, поскольку она влияет на активность биомолекул. В большинстве отчетов продемонстрировано усиление эффекта синтеза наночастиц при высокой температуре (Gericke, Pinches, 2006; Mohammed Fayaz et al., 2009). Однако в нашем случае температура окружающей среды составляла 37 ° C. При высокой температуре клетки производят внутриклеточные наночастицы, которые оседают на дне, тем самым затрудняя отделение наночастиц от клеток (рис. 2E). Более того, ПЭМ-анализ AuNPs, синтезированных при 37 ° C (рис. 3C), показал монодисперсные наночастицы, тогда как при 50 ° C (рис. 3D) наночастицы были прикреплены к клеткам Acinetobacter .

    Характеристика AuNP

    Кристаллическая природа AuNP была подтверждена данными XRD при сравнении со стандартами (файл JCPDS №: 04-0783).Картина XRD показала четыре пика 38,10 °, 44,1 °, 64,5 ° и 77,6 ° при 2θ, соответствующих плоскостям 111, 200, 220 и 311, что указывает на образование кристаллических AuNP (рис. 4A). Картина SAED AuNP показывает четыре кольца отражения, которые возникают от плоскостей решетки 111, 200, 220 и 311 гранецентрированной кубической кристаллической структуры (рис. 4A). Картина XRD и SAED была аналогична AuNP, синтезированным с использованием Klebsiella pneumoniae и Acinetobacter sp. SW30 (Wadhwani et al., 2014; Rajeshkumar, 2016).FESEM (фиг. 4B) и TEM (фиг. 3C) выявили образование сферических связанных с клетками и свободных от клеток AuNP, которые были дополнительно подтверждены анализом EDS с пиком при 2 кэВ (фиг. 4C). FESEM выявил некоторую степень агрегации наночастиц. ПЭМ показала наличие сферических наночастиц со средним размером 15 ± 5 нм. Увеличенное изображение (рис. 3E) наночастиц, сделанное с помощью просвечивающей электронной микроскопии, показало структуру полос решетки с расстоянием 0,23 нм между двумя решетками (рис. 3F).В более ранних отчетах ПЭМ помогал определить местоположение наночастиц, то есть связаны ли они с клетками, внутриклеточными или свободными в среде (Shedbalkar et al., 2014; Wadhwani et al., 2014; Singh et al., 2015). Наночастицы могут стабильно прикрепляться к клеткам с помощью связанных с клетками белков, которые имеют тенденцию удерживать их (Shedbalkar et al., 2014). Слабосвязанные или внутриклеточные наночастицы могут быть разделены путем приложения внешней силы, такой как обработка ультразвуком, повторяющееся замораживание оттаивания или любые другие методы разрушения клеток (Wadhwani et al., 2014). Исходя из расположения наночастиц, решается курс действий для разделения наночастиц. В нашем случае все три типа наночастиц, а именно. Были обнаружены бесклеточные, связанные с клетками и внутриклеточные. Бесклеточные частицы разделяли только процессами центрифугирования, в то время как для получения внутриклеточных и связанных с клетками наночастиц клеточный осадок подвергали обработке ультразвуком с последующим центрифугированием при 12000 об / мин при 4 ° C.

    Рисунок 4 . Характеристика AuNP (A) XRD, (B) FESEM, (C) EDS и (D) FTIR.

    В FTIR-анализе (рис. 4D) FTIR-спектр клеток, участвующих в синтезе AuNP, показал пик при 1,632 см -1 для присутствия амидной группы II. Пик при 3276 см -1 представляет собой наличие растяжения O-H, которое характерно для спиртов и фенолов. После добавления HAuCl 4 новый пик, сформированный при 524 см -1 , указывает на образование хлорида и растяжение C-Cl. FTIR образованных AuNP — значительное увеличение пика при 3274, 1631 и 1538 см -1 , что показало наличие валентных остатков 0-H, амидных и нитрогрупп, соответственно.Такое усиление полосы 1632, 1535 и 1232 см -1 , которые являются полосами для амида I-III, указывает на присутствие белков / полипептидов на поверхности наночастиц. Эти молекулы покрывают наночастицы, обеспечивая стабилизацию (Kalishwaralal et al., 2010). Многие бактерии, такие как Brevibacterium casei, Geobacillus stearothermophilus, Shewanella oneidensis, Acinetobacter sp. SW30 показал участие амидной группы I – III в биовосстановлении HAuCl 4 до AuNP (Kalishwaralal et al., 2010; Мохаммед Фаяз и др., 2011; Суреш и др., 2011; Wadhwani et al., 2016).

    Анализ

    DLS оптимизированных AuNP показал присутствие наночастиц с максимальным размером 60 нм (рис. 5A). Этот размер намного больше, чем размер, наблюдаемый с помощью ПЭМ. Это различие можно объяснить тем фактом, что DLS более пристрастна к обнаружению частиц большего размера, а также учитывает гидродинамический диаметр частиц (Jang et al., 2015). Дзета-потенциал подтверждает наличие отрицательного (-17.4 мВ) на поверхности AuNPs (рис. 5B). Отрицательный заряд предотвращает агломерацию наночастиц за счет отталкивания отрицательно-отрицательного заряда. Наличие заряда на наночастицах зависит от условий процесса синтеза и используемых бактерий (Li et al., 2016; Składanowski et al., 2017).

    Рисунок 5. (A) DLS и (B) дзета-потенциал оптимизированных AuNP.

    Антиоксидантная активность AuNP

    Анализ удаления радикалов DPPH

    DPPH — это свободный радикал, который меняет свой цвет с фиолетового на желтый при восстановлении водородом или электроном (Medhe et al., 2014). В анализе поглощения DPPH соединения, которые способны восстанавливать DPPH, рассматриваются как антиоксиданты. С помощью анализа улавливания радикалов DPPH было обнаружено, что AuNP способны реагировать со свободными радикалами кислорода и, следовательно, обладают антиоксидантной активностью. Фиг. 6A представляет процентную активность по поглощению DPPH возрастающих концентраций AuNP (сферическая форма). Активность по улавливанию радикалов достигает 45% при 150 мкг / мл AuNP. В то время как AuNP (многогранная форма), синтезированные с использованием изолята Acinetobacter SW30, не проявляли антиоксидантных свойств (Wadhwani, 2017).Биологическая активность наночастиц зависит от соотношения сторон частиц. Было продемонстрировано, что наночастицы с высоким соотношением сторон проявляют хорошие антиоксидантные и антимикробные свойства (Sharma et al., 2015).

    Рисунок 6 . Антиоксидантная активность оценивается с помощью (A) активности поглощения DPPH, (B) NO анализа очистки и (C) H 2 O 2 анализа очистки.

    Анализ очистки от оксида азота

    Из-за наличия свободного неспаренного электрона NO считается свободным радикалом, который может взаимодействовать с белками и другими свободными радикалами.Высокоактивный анион пероксинитрит (ONOO ) образуется при соединении NO и пероксидного радикала (Nagmoti et al., 2012). В анализе поглощения оксида азота нитропруссид натрия реагирует с кислородом с образованием нитрита. Ионы нитрита диазотируют сульфаниламидом. Далее диазотированные ионы нитрата соединяются с нафтилэтилендиамином, что приводит к образованию комплекса розового цвета. С другой стороны, антиоксидант отдает протон нитрит-иону, делая его недоступным для реакции, и, таким образом, наблюдалось снижение поглощения (Boora et al., 2014). Процентная активность AuNP по улавливанию NO и аскорбиновая кислота показана на фиг. 6B. Активность по улавливанию NO AuNP увеличивалась с концентрацией с максимумом 150 мкг / мл. Приблизительно 61% активность поглощения NO наблюдалась при концентрации AuNP 150 мкг / мл, в то время как стандартная аскорбиновая кислота показывала активность 65% с той же концентрацией, что указывает на сравнимую активность наших AuNP.

    H
    2 O 2 Анализ продувки

    1,10-фенантролиновый анализ — это высокоспецифичный, воспроизводимый и быстрый спектрофотометрический метод определения активности поглощения H 2 O 2 in vitro в среде (Mukhopadhyay et al., 2016). Антиоксидантное соединение отдает электроны ионам H 2 O 2 и таким образом нейтрализует их до воды (Medhe et al., 2014). Синтезированные AuNP были способны улавливать 87% при концентрации 150 мкг / мл (рис. 6C). He et al. (2012) сообщили, что AuNP могут катализировать быстрое разложение H 2 O 2 . H 2 O 2 активность по улавливанию, проявляемая AuNP, почти равна активности других встроенных AuNP 3,6-дигидроксифлавона, используемых для усиления антиоксидантной активности (Medhe et al., 2014).

    Выводы

    В заключение, это исследование успешно показало, что Acinetobacter sp. GWRVA25 способен синтезировать сферические монодисперсные кристаллические AuNP при нейтральном pH. Физико-химические параметры, такие как концентрация HAuCl 4 , температура и pH, являются основными факторами, которые влияют на форму и размер бактериогенного синтеза AuNP. Более того, оптимизированные AuNP обладают антиоксидантной активностью. Это первое сообщение об антиоксидантной активности AuNP, синтезированных с использованием Acinetobacter sp.Было бы интересно расшифровать молекулярный механизм, участвующий в антиоксидантной активности AuNP.

    Заявление о доступности данных

    Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без излишних оговорок.

    Авторские взносы

    SN: концептуализация, методология, исследование, проверка и написание — первоначальный проект. ЕО: концептуализация, методология, исследование, проверка и редактирование. RS: расследование, написание — первоначальный черновик и редактирование.BC: концептуализация, написание — проверка и редактирование, надзор, администрирование проекта, ресурсы и привлечение финансирования.

    Финансирование

    Это исследование финансировалось Департаментом науки и технологий [DST-PURSE (GOI-A-670)] и Университетом с потенциалом совершенства, Фаза II [UPE-Фаза II (UGC-262-A-2)].

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Благодарности

    Авторы выражают признательность за возможность TEM и SEM, предоставленную центральным контрольно-измерительным оборудованием (CIF), Университет Савитрибай Фуле Пуна, Пуна, Индия. SN был благодарен UPE Phase II-UGC за исследовательскую стипендию.

    Список литературы

    Ахмад А., Сенапати С., Хан М. И., Кумар Р. и Састри М. (2003). Внеклеточный биосинтез монодисперсных наночастиц золота новым экстремофильным актиномицетом, Thermomonospora sp. Langmuir 19, 3550–3553.DOI: 10.1021 / la026772l

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Boora, F., Chirisa, E., and Mukanganyama, S. (2014). Оценка свойств отобранных экстрактов растений Зимбабве и их фитокомпонентов по улавливанию нитритных радикалов. J. Food Process. 2014, 1–7. DOI: 10.1155 / 2014/8

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Чопаде, Б. А., Худдедар, С. Б., Шете, А. М., Тилекар, Дж. Н., Дхавале, Д. Д., Гор, С. Д. и др. (2008). Плазмида, кодирующая IAA, и ее способ . Патент США № 7341868.

    .

    Google Scholar

    Дешпанде, Л. М., и Чопаде, Б. А. (1994). Плазмидно-опосредованная устойчивость к серебру у Acinetobacter baumannii . Biometals 7, 49–56.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    Дакэфалкар, П. К., и Чопаде, Б. А. (1994). Высокие уровни множественной устойчивости к металлам и ее корреляция с устойчивостью к антибиотикам у экологических изолятов Acinetobacter . Biometals 7, 67–74.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    Фарох Р. З., Сачдев Д., Пур Н. К., инженер А., Пардези К. Р., Зинджарде С. и др. (2011). Характеристика способствующих росту растений признаков видов Acinetobacter , выделенных из ризосферы Pennisetum glaucum . J. Microbiol. Biotechnol. 21, 556–566. DOI: 10.4014 / jmb.1012.12006

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Фулсундар, С., Хармс, К., Флатен, Г. Э., Йонсен, П. Дж., Шопаде, Б. А., и Нильсен, К. М. (2014). Потенциал переноса генов везикул наружной мембраны Acinetobacter baylyi и влияние стресса на везикуляцию. заявл. Environ. Microbiol. 80, 3469–3483. DOI: 10.1128 / aem.04248-13

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Фулсундар, С., Кулкарни, Х. М., Джаганнадхам, М. В., Наир, Р., Кирти, С., Сант, П., и др. (2015). Молекулярная характеристика везикул наружной мембраны, высвобожденных из Acinetobacter radioresistens , и их потенциальная роль в патогенезе. Microb. Патог. 83, 12–22. DOI: 10.1016 / j.micpath.2015.04.005

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Гайдхани С., Сингх Р., Сингх Д., Патель У., Шеваде К., Йешвекар Р. и др. (2013). Активность по разрушению биопленок наночастиц серебра, синтезированных Acinetobacter calcoaceticus PUCM 1005. Mater. Lett. 108, 324–327. DOI: 10.1016 / j.matlet.2013.07.023

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Гайдхани, С.В., Ешвекар Р. К., Шедбалкар У. У., Белларе Дж. Х. и Чопаде Б. А. (2014). Биовосстановление платинохлористоводородной кислоты до наночастиц платины с использованием Acinetobacter calcoaceticus . Process Biochem. 49, 2313–2319. DOI: 10.1016 / j.procbio.2014.10.002

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Герике М. и Пинчес А. (2006). Микробиологическое производство наночастиц золота. Золотой Бык. 39, 22–28. DOI: 10.1007 / BF03215529

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Гош, С., Джагтап, С., Мор, П., Шете, У. Дж., Махешвари, Н. О., Рао, С. Дж. И др. (2015a). Dioscorea bulbifera опосредует синтез новых наночастиц оболочки Au с ядром из серебра, обладающих мощной антибио-пленкой и антилейшманиальной активностью. J. Nanomater. 2015, 1–12. DOI: 10.1155 / 2015/562938

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Гош, С., Джини Чако, М. (2016). Barleria prionitis — опосредованный листьями синтез нанокатализаторов серебра и золота. Дж.Наномед. Nanotechnol. 7: 394. DOI: 10.4172 / 2157-7439.1000394

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ghosh, S., More, P., Derle, A., Kitture, R., Kale, T., Gorain, M., et al. (2015b). Диосгенин функционализировал наночастицы оксида железа как новый наноматериал против рака груди. J. Nanosci. Nanotechnol. 15, 9464–9472. DOI: 10.1166 / jnn.2015.11704

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Гош, С., Мор, П., Дерле, А., Патил, А.Б., Маркад, П., Асок, А., и др. (2014). Диосгенин из Dioscorea bulbifera : новый хит для лечения сахарного диабета II типа с ингибирующей активностью в отношении α-амилазы и α-глюкозидазы. PLoS ONE 9: e0106039. DOI: 10.1371 / journal.pone.0106039

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ghosh, S., Nitnavare, R., Dewle, A., Tomar, G. B., Chippalkatti, R., More, P., et al. (2015c). Новые биметаллические наночастицы платина – палладий, синтезированные с помощью Dioscorea bulbifera : противораковая и антиоксидантная активность. Внутр. J. Nanomed. 10, 7477–7490. DOI: 10.2147 / IJN.S

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Гош С., Патил С., Ахире М., Киттюр Р., Кале С., Пардези К. и др. (2012). Синтез наночастиц серебра с использованием экстракта клубней Dioscorea bulbifera и оценка его синергетического потенциала в сочетании с антимикробными средствами. Внутр. J. Nanomed. 7, 483–496. DOI: 10.2147 / IJN.S24793

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Гильоханн, Д.А., Сеферос, Д. С., Даниэль, В. Л., Массич, М. Д., Патель, П. К., и Миркин, К. А. (2010). Наночастицы золота для биологии и медицины. Angew. Chem. Int. Эд. 49, 3280–3294. DOI: 10.1002 / anie.2009

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Хэ С., Чжан Ю., Го З. и Гу Н. (2008). Биологический синтез золотых нанопроволок с использованием экстракта Rhodopseudomonas capsulata . Biotechnol. Прог. 24, 476–480. DOI: 10.1021 / bp0703174

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    He, W., Ху, X., Чжоу, Y.-T., Yin, J.-J., Wamer, W.G., Boudreau, M.D., et al. (2012). Собственная каталитическая активность наночастиц Au в отношении разложения пероксида водорода и улавливания супероксида. Биоматериалы 34, 765–773. DOI: 10.1016 / j.biomaterials.2012.10.010

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Хуанг, X., и Эль-Сайед, M.A. (2010). Наночастицы золота: оптические свойства и применение в диагностике рака и фототермической терапии. J. Adv. Res. 1, 13–28. DOI: 10.1016 / j.jare.2010.02.002

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Джагтап, С.С., и Чопаде, Б.А. (2015). Очистка и характеристика липазы из Acinetobacter haemolyticus TA 106, выделенной из кожи человека. Songklanakarin J. Sci. Технол . 37, 7–13.

    Google Scholar

    Джагтап, С. К., Яванкар, С. П., Пардези, К. Р., и Чопаде, Б. А. (2009). Выделение, характеристика и антибиотикочувствительность геновидов Acinetobacter от животных. Indian Vet. J. 86, 996–999.

    Google Scholar

    Джанг, М.-Х., Ли, С., и Хван, Ю.С. (2015). Определение характеристик наночастиц серебра в экологически значимых условиях с использованием асимметричного фракционирования потока поля-потока (AF4). PLoS ONE 10: e0143149. DOI: 10.1371 / journal.pone.0143149

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Калишваралал, К., Дипак, В., Рам Кумар Пандиан, С. Б., Коттаисами, М., BarathManiKanth, S., Kartikeyan, B., et al. (2010). Биосинтез наночастиц серебра и золота с использованием Brevibacterium casei . Коллоидные поверхности B. 77, 257–262. DOI: 10.1016 / j.colsurfb.2010.02.007

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Киттюр, Р., Хордия, К., Гавэр, С., Гош, С., Мор, П. А., Кулкарни, П. и др. (2014). Конъюгат наночастиц ZnO и красного сандалового дерева: многообещающий антидиабетический агент. J. Nanosci. Nanotechnol. 15, 4046–4051. DOI: 10.1166 / jnn.2015.10323

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Киттюр, Р., Гош, С., Кулкарни, П., Лю, X. Л., Мэйти, Д., Патил, С. И. и др. (2012). Fe 3 O 4 -цитрат-куркумин: многообещающие конъюгаты для удаления супероксида, подавления опухолей и гипертермии рака. J. Appl. Phys. 111: 064702. DOI: 10.1063 / 1.3696001

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ли, Дж., Li, Q., Ma, X., Tian, ​​B., Li, T., Yu, J., et al. (2016). Биосинтез наночастиц золота экстремальной бактерией Deinococcus radiodurans и оценка их антибактериальных свойств. Внутр. J. Nanomed. 11, 5931–5944. DOI: 10.2147 / IJN.S.119618

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Мадханрадж Р., Эйини М. и Баладжи П. (2017). Антиоксидантный анализ наночастиц золота и серебра из съедобных грибов-базидиомицетов. Свободные радикалы Антиоксиданты 7, 137–142. DOI: 10.5530 / fra.2017.2.20

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Макаров В.В., Любовь А.Дж., Синицына О.В., Макарова С.С., Яминский И.В., Тальянский М.Е. и др. (2014). «Зеленые» нанотехнологии: синтез металлических наночастиц с использованием растений. Acta Nat. 6, 35–44.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    Маллик, А., Мор, П., Гош, С., Чиппалкатти, Р., Чопаде, Б. А., Лахири, М., и другие. (2015). Наночастицы, конъюгированные с двойным лекарственным средством, для одновременного воздействия на митохондрии и ядра раковых клеток. ACS Appl. Матер. Интерфейсы 7, 7584–7598. DOI: 10.1021 / am50

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Манивасаган П., Алам М. С., Канг К. Х., Квак М. и Ким С. К. (2015). Внеклеточный синтез бионаночастиц золота Nocardiopsis sp. и оценка его антимикробной, антиоксидантной и цитотоксической активности.Биопроцесс Биосист. Англ. 38, 1167–1177. DOI: 10.1007 / s00449-015-1358-y

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Маркус, Дж., Матиялаган, Р., Ким, Й. Дж., Аббай, Р., Сингх, П., Ан, С. и др. (2016). Внутриклеточный синтез наночастиц золота с антиоксидантной активностью пробиотиком Lactobacillus kimchicus DCY51T, выделенным из корейских кимчи. Enzyme Microb. Technol. 95, 85–93. DOI: 10.1016 / j.enzmictec.2016.08.018

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Медхе, С., Бансал, П., и Шривастава, М. М. (2014). Повышенная антиоксидантная активность наночастиц золота, встроенных в 3,6-дигидроксифлавон: комбинированное исследование. заявл. Nanosci. 4, 153–161. DOI: 10.1007 / s13204-012-0182-9

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Мохаммед Фаяз, А., Баладжи, К., Калайчелван, П. Т., и Венкатесан, Р. (2009). Синтез наночастиц серебра на основе грибов — влияние температуры на размер частиц. Коллоидные поверхности B Биоинтерфейсы 74, 123–126.DOI: 10.1016 / j.colsurfb.2009.07.002

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Мохаммед Фаяз, А., Гирилал, М., Рахман, М., Венкатесан, Р., и Калайчелван, П. Т. (2011). Биосинтез наночастиц серебра и золота с использованием термофильной бактерии Geobacillus stearothermophilus . Process Biochem. 46, 1958–1962. DOI: 10.1016 / j.procbio.2011.07.003

    CrossRef Полный текст

    Мольнар, З., Бодаи, В., Сакач, Г., Erdélyi, B., Fogarassy, ​​Z., Sáfrán, G., et al. (2018). Зеленый синтез наночастиц золота термофильными нитчатыми грибами. Sci. Реп. 8: 3943. DOI: 10.1038 / s41598-018-22112-3

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Муджумдар, С.С., Башетти, С.П., и Чопаде, Б.А. (2014). Плазмида pUPI126-кодируемая продукция пиррольнитрина Acinetobacter haemolyticus A19, выделенная из ризосферы пшеницы. World J. Microbiol.Biotechnol. 30, 495–505. DOI: 10.1007 / s11274-013-1426-x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Mukhopadhyay, D., Dasgupta, P., Sinha Roy, D., Palchoudhuri, S., Chatterjee, I., Ali, S., et al. (2016). Чувствительный спектрофотометрический анализ in vitro на поглощение перекиси водорода с использованием 1,10-фенантролина. Свободные радикалы Антиоксиданты 6, 124–132. DOI: 10.5530 / fra.2016.1.15

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Мерфи, К.Дж., Голе, А. М., Стоун, Дж. У., Сиско, П. Н., Алкилани, А. М., Голдсмит, Е. С. и др. (2008). Золотые наночастицы в биологии: помимо токсичности для визуализации клеток. В соотв. Chem. Res. 41, 1721–1730. DOI: 10.1021 / ar800035u

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Надхе, С.Б., Сингх, Р., Вадхвани, С.А., и Чопаде, Б.А. (2019). Acinetobacter sp. , опосредованный синтез НЧ Ag, его оптимизация, характеристика и синергетическая противогрибковая активность против C.albicans. J. Appl. Микробиол . 127, 445–458. DOI: 10.1111 / jam.14305

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Нагмоти, Д. М., Хатри, Д. К., Джувекар, П. Р., Джувекар, А. Р. (2012). Антиоксидантная активность и способность улавливать свободные радикалы экстрактов донных семян Pithecellobium dulce . Свободные радикалы Антиоксиданты 2, 37–43. DOI: 10.5530 / ax.2012227

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Оницука, С., Хамада, Т., и Окамура, Х. (2019). Получение антимикробных наночастиц золота и серебра из экстрактов чайного листа. Коллоидные поверхности B. 173, 242–248. DOI: 10.1016 / J.COLSURFB.2018.09.055

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Патил Дж., Джог Н. Р. и Чопаде Б. А. (2001). Выделение и характеристика Acinetobacter spp. из верхних дыхательных путей здоровых людей и демонстрацией лектиновой активности. Индиан Дж.Med. Microbiol. 19, 30–35.

    Пур, Н. К., Дусане, Д. Х., Дакефалкар, П. К., Замин, Ф. Р., Зинджард, С. С., и Чопаде, Б. А. (2011). Образование биопленок штаммами Acinetobacter baumannii , выделенными из инфекции мочевыводящих путей и мочевых катетеров. ФЭМС Иммунол. Med. Microbiol. 62, 328–338. DOI: 10.1111 / j.1574-695X.2011.00818.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Раджешкумар, С. (2016). Противораковая активность экологически чистых наночастиц золота против раковых клеток легких и печени. J. Genet. Англ. Biotechnol. 14, 195–202. DOI: 10.1016 / j.jgeb.2016.05.007

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Сачдев Д., Нема П., Дакефалкар П., Зинджарде С. и Чопаде Б. (2010). Оценка филогенетического разнообразия на основе гена 16S рРНК и многообещающих признаков, способствующих росту растений, сообщества Acinetobacter из ризосферы пшеницы. Microbiol. Res. 165, 627–638. DOI: 10.1016 / j.micres.2009.12.002

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Саха, С., и Чопаде, Б. (2002). Влияние пищевых консервантов на геновидов Acinetobacter , выделенных из мяса. J. Food Sci. Technol. 39, 26–32.

    Google Scholar

    Саху, П. К., Айер, П. С., Оук, А. М., Пардези, К. Р., и Чопаде, Б. А. (2012). Характеристика эДНК клинического штамма Acinetobacter baumannii AIIMS 7 и ее роль в формировании биопленок. Sci. Мир J. 2012, 1–10. DOI: 10.1100 / 2012/973436

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Салунке, Г.Р., Гош, С., Сантош Кумар, Р. Дж., Хаде, С., Вашист, П., Кале, Т. и др. (2014). Быстрый и эффективный синтез и определение характеристик серебра, золота и биметаллических наночастиц из лекарственного растения Plumbago zeylanica и их применение для контроля биопленки. Внутр. J. Nanomed. 9, 2635–2653. DOI: 10.2147 / IJN.S59834

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Шакибаи, М. Р., Дакефалкер, П. К., Кападнис, Б. П., Саладжаге, Г.А., и Чопаде Б.А. (1998). Плазмида опосредованная серебром и устойчивость к антибиотикам у Acinetobacter baumannii BL54. Иран. J. Med. Sci. 23, 30–36. DOI: 10.1007 / BF00205194

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Шакибаи, М. Р., Кападнис, Б. П., Дакефалкер, П., и Чопаде, Б. А. (1999). Удаление серебра из стоков фотографических сточных вод с использованием Acinetobacter baumannii BL54. банка. J. Microbiol. 45, 995–1000.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    Шарма, С., Манхар, А. К., Бора, П. Дж., Долуи, С. К., и Мандал, М. (2015). Оценка антиоксидантной и антибактериальной активности золотых (Au) наностержней с различным аспектным соотношением. Adv. Матер. Lett. 6, 235–241. DOI: 10.5185 / amlett.2015.5629

    CrossRef Полный текст

    Шедбалкар, У., Сингх, Р., Вадхвани, С., Гайдхани, С., и Чопаде, Б. А. (2014). Микробный синтез наночастиц золота: современное состояние и перспективы на будущее. Adv. Коллоидный интерфейс Sci. 209, 40–48.DOI: 10.1016 / j.cis.2013.12.011

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Сингх Р., Лаксман Н., Аркил М., Вадхвани С., Шедбалкар У., Чопаде Б. А. и др. (2016). Фитогенное серебро, золото и биметаллические наночастицы как новые противотуберкулезные средства. Внутр. J. Nanomed. 2016, 1889–1897. DOI: 10.2147 / IJN.S102488

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Сингх Р., Шедбалкар, У. У., Вадхвани, С. А., и Чопаде, Б.А. (2015). Бактериогенные наночастицы серебра: синтез, механизм и применение. заявл. Microbiol. Biotechnol. 99, 4579–4593. DOI: 10.1007 / s00253-015-6622-1

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Сингх Р., Вора Дж., Надхе С. Б., Вадхвани С. А., Шедбалкар У. У. и Чопаде Б. А. (2018). Антибактериальная активность бактериогенных наночастиц серебра против нозокомиальных Acinetobacter baumannii . Дж.Nanosci. Nanotechnol. 18, 3806–3815. DOI: 10.1166 / jnn.2018.15013

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Сингх Р., Ваг П., Вадхвани С., Гайдхани С., Кумбхар А., Белларе Дж. И др. (2013). Синтез, оптимизация и характеризация наночастиц серебра из Acinetobacter calcoaceticus и их повышенная антибактериальная активность в сочетании с антибиотиками. Внутр. Дж. Наномед . 4277–4290. DOI: 10.2147 / IJN.S48913

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Складановский, М., Wypij, M., Laskowski, D., Golinska, P., Dahm, H., and Rai, M. (2017). Наночастицы серебра и золота, синтезированные из Streptomyces sp. изолирован из кислой лесной почвы с особым акцентом на его антибактериальную активность в отношении патогенов. Дж. Класт. Sci. 28, 59–79. DOI: 10.1007 / s10876-016-1043-6

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Суреш, А. К., Пеллетье, Д. А., Ван, В., Бройх, М. Л., Мун, Дж. У., Гу, Б. и др. (2011). Биофабрикация дискретных сферических наночастиц золота с использованием бактерии, восстанавливающей металл Shewanella oneidensis . Acta Biomater. 7, 2148–2152. DOI: 10.1016 / j.actbio.2011.01.023

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Вираапандиан С., Савант С. Н., Добл М. (2012). Антибактериальная и антиоксидантная активность белковых наночастиц серебра и золота, синтезированных с Escherichia coli . J. Biomed. Nanotechnol. 8, 140–148. DOI: 10.1166 / jbn.2012.1356

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Вадхвани, С.А. (2017). Синтез, характеристика и биотехнологическое применение наночастиц золота и селена с использованием Acinetobacter spp. из активного ила сточных вод (кандидатская диссертация). Университет Савитрибай Пхуле Пуна, Пуна, Индия.

    Wadhwani, S. A., Gorain, M., Banerjee, P., Shedbalkar, U.U., Singh, R., Kundu, G.C., et al. (2017). Зеленый синтез наночастиц селена с использованием Acinetobacter sp. SW30: оптимизация, характеристика и его противораковая активность в клетках рака молочной железы. Внутр. J. Nanomed. 12, 6841–6855. DOI: 10.2147 / IJN.S139212

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Вадхвани, С. А., Шедбалкар, У. У., Сингх, Р., и Чопаде, Б. А. (2018). Биосинтез наночастиц золота и селена очищенным белком из Acinetobacter sp. SW 30. Enzyme Microb. Technol. 111, 81–86. DOI: 10.1016 / j.enzmictec.2017.10.007

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Вадхвани, С.А., Шедбалкар, У. У., Сингх, Р., Карве, М. С., и Чопаде, Б. А. (2014). Новые полиэдрические наночастицы золота: зеленый синтез, оптимизация и характеристика изолятом из окружающей среды Acinetobacter sp SW30. World J. Microbiol. Biotechnol. 30, 2723–2731. DOI: 10.1007 / s11274-014-1696-y

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Вадхвани, С. А., Шедбалкар, У. У., Сингх, Р., Вашист, П., Прути, В., и Чопаде, Б. А. (2016).Кинетика синтеза наночастиц золота Acinetobacter sp. SW30 изолирован от окружающей среды. Indian J. Microbiol. 56, 439–444. DOI: 10.1007 / s12088-016-0598-0

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Уоттерс, Дж. Л., Сатиа, Дж. А., Куппер, Л. Л., Свенберг, Дж. А., Шредер, Дж. К., и Свитцер, Б. Р. (2007). Ассоциации антиоксидантных питательных веществ и окислительного повреждения ДНК у здоровых афроамериканцев и белых взрослых. Cancer Epidemiol.Биомаркеры Пред. 16, 1428–1436. DOI: 10.1158 / 1055-9965.EPI-06-1030

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Вонг, Д., Нильсен, Т. Б., Бономо, Р. А., Пантапалангкур, П., Луна, Б., и Спеллберг, Б. (2017). Клинический и патофизиологический обзор инфекций Acinetobacter : век вызовов. Clin. Microbiol. Ред. 30, 409–447. DOI: 10.1128 / CMR.00058-16

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Якимович Н.О., Ежевский А.А., Гусейнов Д.В., Смирнова Л.А., Грачева Т.А., Клычков К.С. (2008). Антиоксидантные свойства наночастиц золота изучены методом ЭПР-спектроскопии. Русс. Chem. Бык. 57, 520–523. DOI: 10.1007 / s11172-008-0080-1

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Яванкар, С. П., Пардези, К. Р., и Чопаде, Б. А. (2007). Распространение видов и физиологическая характеристика геновидов Acinetobacter из здоровой кожи человека из племенного населения Индии. Indian J. Med. Microbiol. 25, 336–345. DOI: 10.4103 / 0255-0857.37335

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Йеле, А. Б., Тавал, Н. Д., Саху, П. К., и Чопаде, Б. А. (2012). Новый литический бактериофаг AB7-IBB1 из Acinetobacter baumannii : выделение, характеристика и его влияние на биопленку. Arch. Virol. 157, 1441–1450. DOI: 10.1007 / s00705-012-1320-0

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Юань, Ю.Г., Пэн, К. Л., и Гурунатан, С. (2017). Влияние наночастиц серебра на множественные лекарственно-устойчивые штаммы Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa от коз, инфицированных маститом: альтернативный подход к антимикробной терапии. Внутр. J. Mol. Sci. 18: 569. DOI: 10.3390 / ijms18030569

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Чжан, X.-Ф., Лю, З.-Г., Шен, В., и Гурунатан, С. (2016). Наночастицы серебра: синтез, характеристика, свойства, применения и терапевтические подходы. Внутр. J. Mol. Sci. 17: 1534. DOI: 10.3390 / ijms170

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Разница между операциями выключения, остановки, приостановки и паузы

    Разница между операциями «Завершение работы», «Остановка», «Приостановка» и «Пауза»

    182 пользователя считают эту статью полезной

    В этой статье объясняется разница между действиями Завершение работы , Остановить , Приостановить и Приостановить действий.

    Выключение

    Выключение виртуальной машины в Parallels Desktop аналогично выключению Windows на ПК. Все приложения Windows закрываются, давая вам возможность при необходимости сохранить прогресс, и Windows перестает работать.

    Чтобы выключить Windows, выполните одно из следующих действий:

    • Щелкните значок Parallels в строке меню и выберите «Действия > Завершение работы ».

    • Если строка меню Parallels Desktop видна в верхней части экрана, выберите Действия> Завершение работы .

    Стоп

    Остановка виртуальной машины аналогична отключению кабеля питания от физического компьютера. Чтобы выключить виртуальную машину, используйте стандартную процедуру завершения работы гостевой операционной системы, установленной на ней, или нажмите кнопку «Завершить работу» на панели инструментов Parallels Desktop. Если гостевая операционная система не может быть выключена по той или иной причине, вы можете принудительно остановить виртуальную машину, выполнив одно из следующих действий:

    • Нажатие кнопки Stop на панели инструментов Parallels Desktop или
    • Выбор Остановить из меню Действия .

    Предупреждение: Если вы принудительно остановите виртуальную машину, вы можете потерять все несохраненные данные.

    Приостановить

    Приостановка виртуальной машины похожа на перевод реального компьютера в спящий режим. При приостановке виртуальной машины:

    • Его текущее состояние (включая состояние всех приложений и процессов, запущенных на виртуальной машине) сохраняется в специальный файл на вашем Mac (внутри пакета виртуальной машины).
    • Процесс виртуальной машины остановлен, поэтому ОЗУ и ЦП хоста освобождаются от активности виртуальной машины.
    • Когда приостановленная виртуальная машина возобновляется, она продолжает работать с той же точки, в которой виртуальная машина находилась во время приостановки.

    Приостановка вашей виртуальной машины может оказаться эффективной, если вам нужно перезагрузить Mac, но вы не хотите: закрыть приложения, работающие на виртуальной машине, или потратить много времени на выключение гостевой операционной системы и ее повторный запуск.

    Чтобы приостановить виртуальную машину, выполните одно из следующих действий:

    • Выберите Приостановить из меню Действия, или
    • Нажмите кнопку Приостановить на панели инструментов Parallels Desktop.

    Вы можете видеть прогресс сохранения состояния виртуальной машины.

    Предупреждение: Если вы измените конфигурацию приостановленной виртуальной машины, вы не сможете возобновить работу этой виртуальной машины.

    Ограничения приостановки

    Приостановка виртуальных машин невозможна, если:

    • Это виртуальная машина на основе Boot Camp, и драйверы NTFS установлены на Mac.
    • К виртуальной машине подключены физические разделы / диски.
    • Виртуальная машина загружается с внешнего диска.

    Пауза

    Приостановка виртуальной машины делает следующее:

    • Процесс виртуальной машины приостановлен: активность ЦП виртуальной машины сброшена, но ОЗУ по-прежнему используется процессом виртуальной машины.
    • Освободившиеся ресурсы ЦП затем могут использоваться ОС хоста и ее приложениями или другими виртуальными машинами, работающими на главном компьютере.
    • Процесс возобновления занимает меньше времени по сравнению с приостановкой, поскольку процесс виртуальной машины уже запущен и гостевая RAM загружена.

    Чтобы приостановить виртуальную машину, выполните одно из следующих действий:

    • Нажмите кнопку Pause на панели инструментов Parallels Desktop или
    • Выберите Пауза из меню Действия .

    Чтобы продолжить работу виртуальной машины, нажмите Resume на панели инструментов Parallels Desktop или выберите Resume в меню Actions .

    Parallels Desktop разработан для работы как обычное компьютерное приложение.Это означает, что вам не нужно изменять состояние виртуальной машины с запущенной на приостановленную, приостановленную или остановленную перед переводом Mac в режим сна. В спящем режиме ваш Mac не выделяет ресурсы для запущенных приложений (включая Parallels Desktop и все виртуальные машины), поэтому они останавливаются автоматически. Когда вы запускаете Mac, все приложения автоматически запускаются и снова запускаются.

    компаний S&P 500, изменивших свою политику пожертвований на политические цели — Quartz

    У вас есть портфель акций, пенсионный счет или пенсия в США? Вы, вероятно, инвестировали в несколько компаний из списка S&P 500.

    В свете насилия в Капитолии США и голосований некоторых членов Конгресса против удостоверения результатов президентских выборов 6 января многие из этих компаний объявили о корректировках своих политических взносов. Quartz опросил всех участников рейтинга Standard & Poor’s 500 Index, чтобы узнать, как они меняют свою политику. Мы позвонили и разослали по электронной почте 500 фирм, входящих в индекс, в дополнение к сбору новостных отчетов и заявлений компаний. Это одни из самых крупных и важных компаний, акции которых котируются на бирже США; на момент проведения сертификационного голосования их совокупная рыночная стоимость составляла около 34 триллионов долларов.

    Вместе компании S&P 500 составляют основную часть портфелей многих инвесторов, будь то напрямую через отдельные покупки акций или пассивно через индексные фонды. Биржевые фонды (ETF), которые отслеживают S&P 500, являются наиболее популярными инвестициями в ETF и управляются такими фирмами, как State Street, Vanguard и BlackRock.

    Незаконно компаниям вносить

    прямой взнос на федеральные политические кампании

    Законы США о выборах запрещают компаниям использовать средства компаний для поддержки политического кандидата.Вместо этого сотрудники этих компаний могут делать добровольные взносы в комитеты политических действий, связанные с компаниями. Известные как PAC, они делают взносы кандидатам от имени участников. Компании могут поддержать эти усилия, покрыв часть операционных расходов фонда.

    Торговые группы и отраслевые лобби, к которым принадлежат компании, обычно вносят большой вклад в поддержку сторонников отрасли в Конгрессе. Эти данные не охватывают торговые группы, лоббирующие интересы компаний.

    Компании, которые прекратили взносы PAC в пользу политиков, проголосовавших против подтверждения выборов

    Некоторые из этих компаний заявили, что эти запреты на взносы действуют только на текущий срок кандидата или на текущую сессию Конгресса. Другие не назвали дату окончания — это означает, что запрет может быть навсегда или до тех пор, пока компания не сочтет, что шансы на общественное внимание ниже.

    Компании, которые перестали делать взносы в PAC всем политикам

    Некоторые компании прямо сейчас не хотят иметь ничего общего с политикой; другие просто следуют своему обычному графику взносов.Изучение пожертвований привело к тому, что некоторые компании заявили, что они «приостановят» или «приостановят» все взносы PAC. Некоторые отстранения будут длиться в течение определенного периода от 30 дней до года; другие бессрочные или прекратятся после того, как компания пересмотрит свою политику. Демократы — которые все проголосовали за подтверждение результатов выборов — кричали оскорбительно. «Я не знаю, что вы получаете, отрезая всех. Вы должны наказать виновных », — заявил сенатор Бен Кардин.

    Реальность пожертвований кампании такова, что должна быть кампания, в которую можно было бы внести свой вклад.Удержание пожертвований на квартал или год — это бумажный тигр, особенно если ПКК обычно дает кандидатам только в годы выборов.

    Компании, которые не внесли никаких конкретных изменений в взносы своего ПКК

    Ряд компаний в этом списке указали, что они пересматривают свою политику, но еще не внесли никаких изменений. Другие заявили, что они будут продолжать оценивать взносы по каждому кандидату, включая их голоса при сертификации, чтобы гарантировать, что их деньги поддерживаются людьми с такими же ценностями, что и компания.

    Компании, которые вносят другие изменения в политику своих PAC

    Некоторые компании не сказали бы прямо, что они прекратят делать взносы политикам, проголосовавшим против подтверждения выборов, но сделали явные заявления, чтобы указать, что они не будут поддерживать кандидатов, которых они определяют например, не «уважайте верховенство закона». Другие заявили, что пересматривают свой вклад.

    2

    ПКК «рассматривают» и «оценивают» кандидатов в каждом избирательном цикле.Таким образом, компания, которая запланировала обзоры и оценки вкладов, указана как не внесшая изменений в политику. Компания, которая «переоценивает» свой вклад, внесена в список как изменяющая свою политику.

    * Мы истолковали первоначальное заявление Cigna о том, что его ПКК «прекратит поддержку любого избранного должностного лица, которое поощряет или поддерживает насилие или иным образом препятствует мирной передаче власти», как означающее, что он не будет уступать законодателям, проголосовавшим против подтверждения выборов.С тех пор он высказался некоторым из этих политиков и сказал, что голосование против сертификации само по себе «по определению является частью мирной передачи власти». (Обновлено 10 мая 2021 г.)

    Компании, у которых нет PAC или которые не участвуют в федеральных кампаниях

    Не у каждой компании есть PAC. Те, кто поступает, могут никогда не отдавать деньги членам Конгресса или могут не давать в последнем избирательном цикле.

    Компании, которые не ответили на Quartz или отказались комментировать

    Исправления : В более ранней версии этого сообщения Dupont неправильно указывал, что Dupont приостанавливает пожертвования политикам, голосовавшим против подтверждения результатов выборов.Он временно приостановил все выдачи PAC.

    В более ранней версии этого сообщения Marathon Oil неправильно указывалось как приостанавливающее все пожертвования. Нам не ответили.

    В более ранней версии этого поста упоминалось, что Teradyne приостановила свою работу. Он не спонсирует PAC.

    Составы пестицидов — Обучение безопасности пестицидов Кентукки

    Использование пестицидных составов

    Пестицидные составы представляют собой комбинацию одного или нескольких активных ингредиентов (a.i.), которые борются с вредителями, и несколько инертных ингредиентов. Многие а.о. не растворяются в воде. Некоторые из них могут быть токсичными или небезопасными в обращении. Другие могут быть нестабильными при хранении. Инертные ингредиенты включены в состав продукта для решения этих проблем. Некоторые инертные ингредиенты представляют опасность для здоровья лиц, обрабатывающих пестициды или применяющих пестициды, поэтому их характеристики, наряду с характеристиками активного ингредиента, определяют сигнальное слово, которое появляется на этикетке продукта. Например:

    4 л = 4 фунта на галлон жидкости
    80 WP = 80% смачиваемого порошка
    4L = 200 SL = 200 грамм / литр (1.67 фунтов / галлон) растворимая жидкость

    Пестицидные продукты, продаваемые в виде концентратов, перед применением необходимо смешать с водой или другим носителем. Количество активного ингредиента (а.и.) и вид препарата могут быть указаны на этикетке продукта.

    Концентрированные составы очень экономичны при обработке больших площадей, но может быть трудно измерить количества, необходимые для небольших площадей. Кроме того, транспортировка, смешивание, необходимость в специализированном распылительном оборудовании и время очистки могут сделать использование концентратов неудобным или непрактичным.

    Составы

    , готовые к применению, могут быть более подходящими для небольших участков. Они содержат небольшое количество активного ингредиента (часто 1% или менее а.и. на единицу объема). Некоторые содержат растворители на нефтяной основе; другие на водной основе. Составы RTU уже разбавлены и могут продаваться в контейнерах, которые служат в качестве аппликаторов. Примеры составов RTU включают аэрозоли (A), гранулы (G) и большинство приманок (B).

    Большинство составов пестицидов представляют собой жидкие или сухие вещества. Некоторые пестициды доступны более чем в одном.Стоимость всегда важна, но вопросы безопасности и борьбы с вредителями должны быть на первом месте. Выберите рецептуру, наиболее подходящую для работы, на основе:

    • Legal, маркированное использование
    • Сигнальное слово
    • Безопасность аппликатора
    • Экологическая безопасность
    • Биология вредителей
    • Характеристика объекта
    • Мишень (обрабатываемая поверхность)
    • Оборудование для нанесения

    Ответы на эти вопросы могут помочь с решением:

    • Указано ли на этикетке продукта предполагаемое использование и место эксплуатации?
    • Есть ли у меня необходимое оборудование для нанесения?
    • Можно ли соответствующим образом нанести состав в условиях области применения?
    • Достигнет ли рецептура намеченной цели и останется на месте?
    • Может ли состав повредить обрабатываемую поверхность или листву?
    • Будет ли менее опасный состав столь же эффективным?

    [возврат]

    Жидкие составы

    Большинство жидких составов разбавляют водой для получения готового спрея.Однако некоторые этикетки рекомендуют пользователям смешивать продукт с другим растворителем, например растительным маслом или другим легким маслом в качестве носителя.

    Три основных типа жидких составов — это растворы, суспензии и эмульсии:

    Раствор получают путем растворения вещества в жидкости. Настоящее решение — это смесь, которую нельзя отделить фильтром или другими механическими средствами. Обычно после смешивания он не разделяется и не «оседает» на отдельные части. Свет может проникать в большинство растворов.

    Суспензия — это однородная смесь очень мелких твердых частиц в жидкости. Суспензию, которая находится на полке в течение некоторого времени, необходимо хорошо встряхнуть, чтобы равномерно перемешать жидкую и твердую части, прежде чем переливать ее в бак для опрыскивания. Добавляется вода, чтобы получился готовый спрей. Должно быть достаточно перемешивания, чтобы продукт равномерно распределялся в баке для опрыскивания во время нанесения. Большинство суспензий мутные или непрозрачные; свет не может пройти сквозь них.

    Эмульсия — это смесь капель одной жидкости в другой жидкости.Каждый ингредиент сохраняет свои уникальные свойства и индивидуальность.

    В эмульсии активный ингредиент растворен в растворителе на масляной основе. Эмульгатор позволяет активному ингредиенту и растворителю равномерно смешиваться с водой перед нанесением. Некоторое взбалтывание может потребоваться, чтобы эмульсия не расслаивалась. Как правило, эмульсии имеют «молочный» вид.

    Обычные жидкие составы

    Эмульгируемый концентрат (E или EC)

    Составы

    ЕС обычно содержат растворимый в масле жидкий активный ингредиент, растворитель на нефтяной основе и эмульгатор (смешивающий агент).Эмульгатор позволяет активному ингредиенту в растворителе смешиваться с водой, образуя эмульсию. ЭК представляют собой универсальные составы, которые можно применять со многими типами опрыскивателей.

    Состав

    Преимущества

    Недостатки

    E или EC

    Легко обрабатывать и измерять; Требуется небольшое волнение; Буду не отдельные; Небольшие видимые остатки на растении; Не изнашивайте детали распылителя. или заглушки экранов или форсунок; Редко оставляет видимые остатки

    Легко впитывается через кожу; Высокая концентрация; Легко чрезмерная или недостаточная обработка из-за ошибок смешивания или калибровки; Может гореть нежная листва растения; Может размягчать резиновые или пластиковые шланги, прокладки и насос. части; Может вызывать разъедание глаз или кожи

    Решения (S, CS)

    Некоторые активные ингредиенты пестицидов легко растворяются в жидком растворителе, таком как вода или разбавитель на нефтяной основе.При смешивании они образуют раствор, который не оседает и не расслаивается. Составы этих пестицидов обычно содержат активный ингредиент, растворитель (носитель или разбавитель) и один или несколько других ингредиентов. Эмульгатор не требуется. Решения подходят для любого типа опрыскивателей и зарегистрированы на многих сайтах.

    Состав

    Преимущества

    Недостатки

    S или CS

    Легко обрабатывать и измерять; Вмешательство не требуется; Маленький видимые остатки на растении; Не изнашивает детали распылителя, сетчатые пробки или насадки; Редко оставляет видимые остатки

    Доступность ограничена; Разливы и брызги трудно очистка или дезактивация

    Эмульсии в воде (EW)

    Эмульсия в воде представляет собой дисперсию жидкого активного ингредиента в воде.Эти составы обладают пониженной кожной токсичностью и меньшим потенциалом нанесения вреда окружающей среде. EW с меньшей вероятностью повредят нежную листву растений, поскольку они не содержат растворителей, содержащихся в эмульгируемых концентратах.

    Текучие (F, L или SC)

    Некоторые активные ингредиенты не растворяются ни в воде, ни в масле, поэтому их пропитывают сухим носителем, например глиной, который измельчают до мелкого порошка. Порошок суспендируют в небольшом количестве жидкости для получения густого жидкого состава.Используемые сокращения включают «F» для текучей среды, «L» для жидкости и «SC» для концентрата суспензии. Аббревиатуры 4F или 4L означают 4 фунта а.и. на галлон. Они считаются жидкостями, потому что конечный продукт представляет собой густую жидкость. Текучие средства часто используются для тех же операций по борьбе с вредителями, что и ЭК.

    Состав

    Преимущества

    Недостатки

    F, L или SC

    Прост в обращении и измерении; Редко обжигает листву растений; Легко перемешивается в баке; Отсутствие воздействия пыли на аппликатор

    Низкое впитывание кожей; Осядет, требует умеренного возбуждения; Может оставлять видимые следы; Возможен износ форсунок

    Микроинкапсулированные пестициды (M или ME)

    Это сухие частицы или капли жидкости, окруженные пластиком, крахмалом или другим покрытием.Их смешивают с водой и наносят в виде спреев. После нанесения происходит «замедленное» или медленное высвобождение и.и. В зависимости от физических свойств покрытия выделение может зависеть от погодных условий. Если высвобождение происходит медленнее, чем обычно (например, из-за сухой или прохладной погоды), остатки могут оставаться на обработанных растениях или поверхностях дольше, чем ожидалось. В результате некоторые микрокапсулированные продукты имеют относительно длинные ограниченные интервалы входа или предуборочные интервалы.

    Некоторые микрокапсулированные пестициды содержат высокотоксичные материалы с покрытиями для повышения безопасности оператора.Другие микрокапсулированы для уменьшения окрашивания или запаха или для защиты активного ингредиента от разрушения солнечным светом. Инсектициды в микрокапсулах могут быть очень опасными для пчел, если частицы не распадаются быстро и имеют такой же размер, как пыльцевые зерна. Пчелы-собиратели могут собрать их и отнести обратно в улей. Позже, когда покрытие разрушается и выделяет пестицид, колония может быть отравлена. Некоторые микрокапсулированные продукты, внесенные в почву, могут быть более склонны к вымыванию в грунтовые воды.

    Состав

    Преимущества

    Недостатки

    М или МЭ

    Более безопасное обращение; Более длительный остаточный контроль; Уменьшенное растение травма (ожог)

    Частицы размера пыльцы представляют опасность для пчел; Требовать возбуждения; Более медленная поломка может привести к увеличению пожнивных остатков при сборе урожая

    Аэрозоль (A)

    Эти составы содержат один или несколько активных ингредиентов и растворитель.Большинство аэрозолей содержат низкий процент активного ингредиента. Есть два типа составов.

    • Готовые к использованию (RTU) аэрозольные составы обычно представляют собой небольшие автономные единицы, которые выделяют пестициды при срабатывании клапана сопла. Инертный сжатый газ проталкивает пестицид через тонкое отверстие, когда газ выпускается, образуя мелкие капли. Эти продукты эффективны в теплицах, на небольших участках внутри зданий или на ограниченных открытых площадках. Коммерческие модели, вмещающие от 5 до 10 фунтов пестицидов, обычно многоразовые.
    • Составы
    • для генераторов дыма или тумана используются в машинах, в которых используется быстро вращающийся диск или нагретая поверхность для образования и распределения очень мелких капель. Эти составы используются в основном для борьбы с насекомыми в таких сооружениях, как теплицы, сараи и склады, а также для борьбы с комарами и кусающимися мухами на открытом воздухе. Оба предоставляют простые способы обработки замкнутых пространств, но имеют высокую опасность при вдыхании, а аэрозоли имеют высокий риск пожара / взрыва.

    [возврат]

    Сухие составы

    Активный ингредиент находится на поверхности твердого носителя, такого как тальк, глина или молотые кукурузные початки.

    Гранулы (G)

    Гранулы представляют собой готовые к употреблению составы. Активный ингредиент либо покрывает гранулы снаружи, либо абсорбируется небольшими частицами глины, талька или подобного носителя. Количество активного ингредиента относительно невелико, обычно от менее 1% до 15%. Носители во многих гранулированных составах поглощают влагу, поэтому влажность влияет на их расход во время нанесения. Кроме того, разные «партии» одного и того же состава могут немного отличаться по размеру, форме и плотности.Поэтому важно часто калибровать устройства для гранулированных приложений.

    После нанесения активный ингредиент медленно высвобождается. Для активации продукта обычно требуется дождь или полив. Гранулированные составы в основном используются для внесения химикатов в почву для борьбы с сорняками, нематодами или почвенными насекомыми. Гранулированные составы используются для доставки системных пестицидов, которые усваиваются корнями растений. Они также используются в водных условиях для борьбы с личинками комаров и водными сорняками.

    Состав

    Преимущества

    Недостатки

    г

    Несет постановка цели; Может разрушаться медленнее

    Требуется влага для активация; Потенциальная опасность проглатывания птиц

    Смачиваемые порошки (WP или W)

    Активные ингредиенты наносятся на мелко измельченные частицы талька или глины.Большинство составов WP также включают смачивающие и / или диспергирующие агенты. Обычно их смешивают с водой до образования суспензии и наносят в виде спрея. Они быстро осядут без постоянного волнения. Чтобы приготовить суспензию для опрыскивания, вы должны сформировать суспензию, смешав WP с небольшим количеством воды, а затем разбавить эту смесь суспензии.

    Смачиваемые порошки эффективны при большинстве проблем с вредителями и в большинстве типов распылительного оборудования, где возможно перемешивание. Они обладают отличной остаточной активностью и обычно не повреждают обработанные поверхности.Когда вы наносите распыляемую суспензию WP на цель, большая часть пестицида остается на поверхности. Это верно даже для пористых материалов, таких как бетон, штукатурка и необработанная древесина. В таких случаях в пористый материал проникает только водоноситель. Частицы смачиваемого порошка остаются на обработанной поверхности.

    Состав

    Преимущества

    Недостатки

    Вт или WP

    Низкое поглощение через кожу; Низкий потенциал сжигания листвы

    Высокая опасность при вдыхании при заливке и смешивании; Требует хорошее перемешивание в баке опрыскивателя; Абразив для форсунок и деталей распылителя (не SP)

    Растворимый порошок (SP или S)

    Эти составы выглядят как смачиваемые порошки.Однако при смешивании с водой растворимые порошки легко растворяется в воде и образует настоящий раствор. После тщательного перемешивания нет необходимо дополнительное перемешивание. Количество активного ингредиента в растворимой порошки колеблются от 15% до 95%; обычно более 50%. Растворимые порошки имеют все преимущества WP, но только один из недостатков: ингаляция опасность при смешивании. Инсектицид ацефат — один из немногих пестицидов. доступны в этой рецептуре, потому что очень мало активных ингредиентов растворяется в вода.

    Водно-диспергируемые гранулы (WDG) или сухие текучие вещества (DF)

    Это составы WP, которые были спрессованы в беспыльные частицы размером с гранулы. Большинство из них поставляются с измерительными приборами для конкретных продуктов. Отметки приращения в сухих унциях (или фунтах) на них основаны на плотности продукта (вес на единицу объема). Эти составы легко выливаются из контейнеров, их легче измерить, и с ними легче обращаться, чем с WP. Их тоже смешивают с водой и наносят в виде суспензии для распыления.Попадая в воду и взбалтывая, гранулы распадаются на мелкий порошок. Этикетка может содержать конкретные инструкции, чтобы сделать смешивание более эффективным. Эти составы требуют постоянного перемешивания, чтобы они оставались взвешенными в воде.

    WDG разделяют преимущества и недостатки WP. Тем не менее, у WDG есть одно дополнительное преимущество: снижение риска воздействия на оператора. На этикетке 80 WDG указано, что этот сухой продукт содержит 80% по весу активного ингредиента и имеет форму вододиспергируемых гранул.

    Состав

    Преимущества

    Недостатки

    WDG или DF

    Низкое поглощение через кожу; Низкий потенциал сжигания листвы

    Высокая опасность при вдыхании при заливке и смешивании; Требуется хорошее перемешивание в баке для опрыскивания; Абразив для форсунок и деталей распылителя

    Водорастворимые пакеты / пакеты (WSB)

    Все большее количество пестицидов доступно в водорастворимых пакетах (WSB).Специальная пленка упаковывает точное количество смачиваемого порошка, растворимого порошка или геля, содержащего активный ингредиент (ингредиенты) пестицида. При добавлении в воду в резервуаре для опрыскивания мешок растворяется и высвобождает содержимое, которое затем суспендируется или растворяется. Этот метод упаковки снижает риск воздействия на человека. Это также упрощает измерения.

    Водорастворимая упаковка не растворяется в органических растворителях или неразбавленных EC. В результате смесители и загрузчики должны следовать инструкциям на этикетке при приготовлении смеси для опрыскивания.Храните водорастворимые продукты в сухом месте, не прикасайтесь к ним влажными или мокрыми перчатками. Пакеты содержат количество пестицидов для определенных объемов распыления, например, 100 галлонов воды.

    Состав

    Преимущества

    Недостатки

    WSB или WSP

    Безопасное обращение; Точные заранее отмеренные суммы

    Подходит только для определенных объемов; Пакеты могут испортиться или порваться.

    Приманки (B)

    Это составы RTU, содержащие активный ингредиент, смешанный с пищей или другим привлекательным веществом. Приманка либо привлекает вредителей, либо ставится там, где они её найдут. Для внесения может потребоваться специальное оборудование, а затраты на обработку могут быть слишком большими для таких проблем, как борьба с отложениями кукурузы или соевых бобов при нулевой обработке почвы.

    [возврат]

    Смеси для резервуаров для пестицидов

    Объединение двух или более пестицидов в баковой смеси может быть удобным и экономичным, экономя время, рабочую силу, топливо и износ оборудования. Комбинированное применение также снижает уплотнение почвы и риск механического повреждения сельскохозяйственных культур или обрабатываемых площадей. Ситуации, подходящие для перемешивания в резервуаре, включают сочетание фунгицида и инсектицида для обработки фруктовых деревьев или полевых культур или сочетание двух (2) или более гербицидов для увеличения количества контролируемых видов сорняков (расширенный спектр борьбы).

    Производители могут комбинировать два или более пестицида, обычно применяемых одновременно, в упаковках премиксов. Если желаемый премикс недоступен, федеральный закон разрешает вам комбинировать два или более пестицидов, если только маркировка одного или нескольких предполагаемых продуктов специально не запрещает это. Например, некоторые предупреждения о смеси в резервуаре для проб могут включать:

    При работе с баковой смесью соблюдайте все ограничения, инструкции по применению, культуру / участки, нормы использования, коэффициенты разбавления, меры предосторожности и ограничения, указанные на этикетке продукта баковой смеси.
    *****
    Не превышайте указанную дозировку и соблюдайте самые строгие меры предосторожности и ограничения, указанные на этикетке. Этот продукт нельзя смешивать с каким-либо продуктом, который запрещает такое смешивание.
    *****
    Смеси в резервуарах или другое применение продуктов, упомянутых на этой этикетке, разрешены только в тех государствах, в которых упомянутые продукты и способы использования зарегистрированы.

    Совместимость смесей пестицидов

    Пестициды должны быть совместимыми, чтобы обеспечить эффективную борьбу с вредителями.Если на этикетках не указаны инструкции по смешиванию, но они не запрещены, то ответственность за

    несете вы.
    • определение совместимости путем «jar-тестирования» комбинаций. И
    • проверка на фитотоксичность (повреждение растений) путем тестирования смеси на небольшом количестве растений.

    Пестициды могут быть несовместимы по одной из двух основных причин:

    • физический — они желируются, свертываются, пенится или остаются отдельными слоями при смешивании.
    • chemical — их активность по борьбе с вредителями изменяется при смешивании.

    Антагонизм и синергизм — основные типы химической несовместимости. Антагонизм возникает, когда снижается эффективность борьбы с вредителями одного или обоих смешанных продуктов. Синергизм возникает, когда смешивание увеличивает активность одного или нескольких продуктов. В некоторых случаях это может обеспечить более эффективную борьбу с вредителями, но в других случаях результатом может быть повреждение урожая.

    [возврат]

    Добавки / Адъюванты

    Добавки / адъюванты — это химические вещества, которые могут улучшить действие пестицида ИЛИ изменить характеристики состава пестицида или смеси для опрыскивания.Перед использованием любого адъюванта сверьтесь с этикеткой пестицидного продукта. Некоторые продукты имеют очень конкретные рекомендации или запреты на адъюванты. Если на этикетке указано использовать адъювант, используйте требуемый тип с указанной скоростью. Многие продукты уже содержат те адъюванты, которые производитель или разработчик считает необходимыми или полезными. Добавление других может фактически снизить эффективность или привести к непредвиденным и, возможно, нежелательным эффектам.

    Адъюванты сами по себе не обладают пестицидной активностью, поэтому EPA не регистрирует их.В результате отсутствуют стандарты по составу, качеству или производительности. Свяжитесь с производителем, если у вас есть вопросы по адъюванту.

    Типы адъювантов

    Пеногаситель (пеногаситель) снижает чрезмерное пенообразование смесей для опрыскивания, которое может возникнуть в результате использования некоторых поверхностно-активных веществ и / или при интенсивном перемешивании.

    Буфер или модификатор pH позволяет пестицидам смешиваться с разбавителями или другими пестицидами различной кислотности или щелочности.Сначала следует добавить буфер и хорошо перемешать. Вода должна быть нейтральной или слегка кислой перед добавлением пестицидов или других адъювантов.

    Агент совместимости помогает эффективно комбинировать пестициды (или пестициды и удобрения); они могут уменьшить или устранить проблемы смешивания.

    Добавка для контроля сноса (добавка для осаждения) увеличивает средний размер капель и / или снижает количество образующихся «мелких капель» (очень мелких капель).

    Разбавитель или наклейка сохраняет активность пестицидов на мишени в течение длительного периода времени или на восковой листве.

    Пенетрант для растений позволяет пестицидам попадать в обработанную листву. Некоторые пенетранты растений могут усиливать движение листьев некоторых, но не всех видов растений.

    Safener снижает токсичность пестицидного состава для обработчика пестицидов или для обработанной поверхности.

    Разбрасыватель позволяет пестициду образовывать равномерный слой на обрабатываемой поверхности.

    Наклейка

    позволяет пестицидам дольше оставаться на обработанной поверхности. Некоторые наклейки помогают удерживать твердые частицы на обработанных поверхностях.Это сокращает количество смываемой водой из-за дождя или орошения. Другие уменьшают испарение и / или замедляют разложение под действием солнечного света.

    Загуститель увеличивает вязкость (густоту) распыляемых смесей. Они могут уменьшить снос и / или замедлить испарение.

    Смачиватель позволяет смешивать составы WP с водой.

    Поверхностно-активные вещества обычно используются в качестве адъювантов для изменения свойств диспергирования, растекания и смачивания капель спрея. Эти продукты физически изменяют поверхностное натяжение капли спрея.Для хорошего результата некоторые спреи с пестицидами должны тщательно и равномерно смачивать обработанную листву. Поверхностно-активные вещества, снижающие поверхностное натяжение, позволяют каплям растекаться, а не «рассыпаться». Это приводит к лучшему охвату и увеличивает вероятность контакта вредителей с пестицидами. Поверхностно-активные вещества особенно полезны при обработке растений с восковыми или опушенными листьями.

    Поверхностно-активные вещества классифицируются по тому, как они расщепляются на заряженные атомы или молекулы, называемые ионами.

    • Анионные поверхностно-активные вещества имеют отрицательный (-) заряд. Чаще всего они используются с контактными пестицидами, которые контролируют вредителя путем прямого контакта, а не систематически поглощаются им.
    • Катионные поверхностно-активные вещества имеют положительный (+) заряд. Не используйте их как «самостоятельные» поверхностно-активные вещества — часто они являются фитотоксичными.
    • Неионные поверхностно-активные вещества не имеют электрического заряда. Их часто используют с продуктами системного действия, чтобы помочь пестицидам проникнуть в кутикулу растений.Они совместимы с большинством пестицидов. Пестицид может вести себя по-разному в присутствии анионного, катионного или неионогенного поверхностно-активного вещества. По этой причине вы должны следовать указаниям на этикетке при выборе одной из этих добавок. Выбор неправильного поверхностно-активного вещества может снизить эффективность и повредить обработанные растения или поверхности.

    Термины, используемые в отношении пестицидных добавок, могут сбивать с толку. Иногда люди используют слова «адъювант» и «сурфактант» как синонимы.Однако адъювант — это ЛЮБОЕ вещество, добавляемое для изменения свойств пестицидного состава или готового спрея. Поверхностно-активное вещество — это особый вид адъюванта, который влияет на взаимодействие распыляемой капли и обработанной поверхности. Все поверхностно-активные вещества являются адъювантами, но не все адъюванты являются поверхностно-активными веществами. Например, добавки для контроля сноса и антидоты не являются поверхностно-активными веществами.

    Выбор адъюванта
    • Прочтите этикетку и следуйте ей. Рекомендуется ли адъювант? Если да, то какого? Не делайте замен.На некоторых этикетках продуктов может быть рекомендован адъювант для одного типа использования или участка, но запрещен любой вид адъюванта для другого указанного использования или участка. Многие готовые продукты для конечного использования уже содержат адъюванты, и добавление адъювантов «на лету» может снизить эффективность. Предположим, например, что в состав определенного продукта входит смачивающий агент. Если вы добавите еще один смачивающий агент при смешивании и загрузке спрея для листовой обработки, продукт может не растекаться и укрываться лучше. Вместо этого дополнительный адъювант может увеличить сток, уменьшить осаждение и даже повредить целевое растение.
    • Используйте только те адъюванты, которые произведены для использования в сельском хозяйстве или садоводстве. Не используйте промышленные продукты или бытовые моющие средства в смесях для распыления пестицидов.
    • Никакие адъюванты не заменяют хорошие методы нанесения.
    • Скептически относитесь к утверждениям об адъювантах, таких как «улучшает поглощение корнями» или «сохраняет оборудование для опрыскивания в чистоте», если надежный источник не может предоставить основанные на исследованиях доказательства в их поддержку. Используйте только те адъювантные продукты, которые были протестированы и признаны эффективными для вашего предполагаемого использования.
    • Тестовый спрей смешивается с адъювантами на небольшой площади перед тем, как приступить к полномасштабному использованию.

    [возврат]

    Сводка

    Компоненты сформулированного пестицида включают как активные, так и инертные ингредиенты. Активный ингредиент контролирует вредителей. Инертные ингредиенты включают носители или разбавители и адъюванты. Тип рецептуры может быть указан в идентификационной информации на передней панели этикетки.Узнайте, какие препараты доступны для активных ингредиентов пестицидов, которые вы будете использовать. Чтобы решить, какой состав лучше всего подходит для конкретного места и ситуации, вы должны знать свойства — и уметь оценивать плюсы и минусы — различных типов рецептур. Вы должны быть знакомы с типами рецептур и свойствами активных ингредиентов, чтобы понимать характеристики продуктов, которые вы используете, и правильно их применять.

    Большинство пестицидов для конечного использования содержат адъюванты.Хотя сами адъюванты не обладают какой-либо прямой пестицидной активностью, их добавляют в составы пестицидов для улучшения характеристик продукта. Вы должны знать, когда и как использовать адъювант.

    При выборе состава пестицида необходимо учитывать несколько факторов. К ним относятся

    • риски и преимущества, связанные с доступными опциями,
    • практичность использования определенного состава на определенном участке для борьбы с целевым вредителем, а
    • , обеспечит ли сформулированный продукт эффективный контроль.

    Понимание свойств обычных составов перед выбором пестицида поможет вам избежать проблем и эффективно и действенно применять свой продукт.

    [возврат]

    Хранение сахарозы в суспензионных культурах клеток Saccharum sp. (сахарный тростник) регулируется циклом синтеза и разложения

    Мы исследовали регуляцию хранения сахарозы в суспензионных культурах сахарного тростника.При выращивании в периодической культуре накопление сахарозы начинается примерно через 5 дней, когда запас азота исчерпан. Накопление сахарозы также вызывается уменьшением поступления азота в клетки, растущие в хемостате. Измеренная активность сахарозо-фосфатсинтазы достаточно высока, чтобы учесть скорость накопления сахарозы, при условии принятия мер предосторожности, чтобы избежать гидролиза UDP во время анализа. Клетки обладали высокой активностью сахарозо-синтазы, но эксперименты с пульсацией с [(14) C] глюкозой и немеченой фруктозой показали, что этот фермент не вносил существенного вклада в синтез сахарозы, поскольку глюкозильная и фруктозильная части сахарозы были одинаково помечены.Несколько линий доказательств демонстрируют наличие цикла, в котором сахароза синтезируется и разлагается одновременно; активность сахарозофосфатсинтазы удваивается во время фазы, когда клетки активно накапливают сахарозу, но активность также высока после прекращения хранения или когда сахароза ремобилизуется; импульсные эксперименты с [(14) C] фруктозой также показали, что синтез сахарозы происходит не только во время фазы хранения, но также после прекращения хранения и во время быстрой мобилизации сахарозы; клетки содержат высокую активность сахарозосинтазы и щелочной инвертазы, и обе они максимальны, когда происходит накопление сахарозы; даже на этапе хранения.Импульсы [(14) C] фруктозы приводят к маркировке свободной глюкозы, что свидетельствует о быстром синтезе и разложении сахарозы. Предполагается, что скорость и степень хранения сахарозы регулируются этим циклом синтеза и разложения. Представлены измерения активности ферментов и уровней метаболитов, и обсуждается, какие факторы могут способствовать регулированию этих двух противоположных потоков и, следовательно, скорости чистого хранения и мобилизации сахарозы.

    .

    Похожие записи

    Вам будет интересно

    Обязанности менеджера: Что входит в должностные обязанности менеджера?

    Какое значение имеет самообразование: Какое значение имеет самообразование?Пожалуйста,краткий ответ.

    Добавить комментарий

    Комментарий добавить легко