Совместная работа

Вносить полный вклад в совместные усилия: предлагать идеи, быть открытым для получения идей, обсуждать с другими для оценки идей и согласования общего курса действий, за которые все несут совместную ответственность. 4C Framework определяет сотрудничество как эффективную, гибкую и уважительную работу с разнообразными командами, готовностью идти на компромисс, брать на себя общую ответственность и ценить вклад других. Основное различие между этими двумя определениями заключается в совместном обсуждении, оценке и переговорах, что представляет собой гораздо больше, чем компромисс, и требует большего, чем уважение.

Уход

Проявлять истинное сочувствие и неподдельную заботу о других, принимая все возможные меры, чтобы избежать вреда и поощрять доброту и сострадание.Эта концепция заботы подчеркивается пониманием того, что все мы являемся различными частями одной единой ткани, что мы становимся теми, кто мы есть, благодаря нашим отношениям с другими и благодаря этому мы несем совместную ответственность друг за друга.

Коммуникация — это еще один C из 4C Framework, но он не является частью 5C современного образования, потому что он не считается фундаментальной характеристикой обучения 21-го века, а скорее вплетен в педагогическую и человеческую деятельность, такую ​​как школьный диалог или школьный диалог. формальная презентация проекта, который характеризуется этими новыми основами, заменяющими старый статус-кво школьного образования.Система современного образования 5С предлагается в качестве альтернативы традиционному школьному обучению, которое в значительной степени основано на конкуренции между учащимися, воспроизведении стандартизированных знаний, следовании безупречным правилам, фрагментации обучения на несвязанные предметы и толерантности или вверх, с другими, особенно с теми, кто отличается от вас. Таким образом, вот старые основы традиционной школы вместе с 5Cs Framework для переосмысления образования в 21 веке.

Овладейте пятью критериями кредитоспособности

В то время как средний балл «C» может показаться средним по академической шкале, выполнение пяти кредитных баллов является ключом к получению финансирования бизнеса от банков и других финансовых учреждений.

Пять C или характеристики кредита — характер, мощность, капитал, условия и обеспечение — являются основой, используемой многими традиционными кредиторами для оценки потенциальных заемщиков малого бизнеса.

Посмотреть варианты кредита

с Fundera от NerdWallet

Пять кредитных баллов

1.Характер 2. Производительность/денежный поток 3. Капитал 4. Условия 5. Обеспечение

Не существует каких-либо строгих указаний относительно того, как кредиторы взвешивают эти атрибуты — разные кредиторы могут придавать большее значение одному по сравнению с другим.

Например, онлайн-кредиторы могут быть более склонны учитывать личный кредитный рейтинг заемщика в заявке на получение кредита, в то время как банки могут больше заботиться о залоге и деньгах, которые вы вложили в бизнес.

Ключом к успеху малого бизнеса является концентрация на вещах, которые вы можете контролировать, говорит Брэд Фаррис, консультант по развитию бизнеса Anchor Advisors в Чикаго.«Пять «С» — это одна из тех вещей, которые просто существуют — банки верят в них, поэтому нам приходится с этим сталкиваться», — говорит он.

Мы собрали пять характеристик и несколько советов, как добиться наилучших результатов.

1. Персонаж

Что это: Мнение кредитора об общей благонадежности, достоверности и личности заемщика.

Почему это важно: Банки хотят кредитовать людей, которые ответственны и выполняют свои обязательства.

Как оценивается: исходя из вашего опыта работы, кредитной истории, полномочий, рекомендаций, репутации и взаимодействия с кредиторами.

Как это освоить: «Характер — это то, что вы можете контролировать и продвигать, но только если у вас есть банк, который заботится об отношениях», — говорит Фаррис.

Если вы используете местный или общественный банк, стройте отношения. Фаррис рекомендует делитесь хорошими новостями о своем бизнесе с вашим банкиром и находите способы продвижения банка «Сделайте себя кем-то, кому они захотят одолжить», — говорит он

2. Емкость/денежный поток погасить кредит.

Почему это важно: кредиторы хотят быть уверены, что ваш бизнес генерирует достаточный денежный поток для полного погашения кредита.

Как оценивается: На основании финансовых показателей и ориентиров (коэффициенты долга и ликвидности, отчеты о движении денежных средств), кредитного рейтинга, истории займов и погашений.

Как это освоить: некоторые онлайн-кредиторы могут быть более открытыми, чтобы помочь вам финансировать немедленные разрывы денежных потоков. Если вы ориентируетесь на местные банки, погасите задолженность перед подачей заявления. Кроме того, рассчитайте свой денежный поток, чтобы понять отправную точку, прежде чем отправиться в банк.

3. Капитал

Что это такое: сумма денег, вложенная владельцем бизнеса или управленческой командой.

Почему это важно: Банки охотнее кредитуют владельцев, которые вложили в предприятие часть собственных денег. Это показывает, что у вас есть «кожа в игре».

Как оценивается: исходя из суммы денег, которую заемщик или управленческая команда вложила в бизнес.

Как это освоить: По данным Администрации малого бизнеса, почти 60% владельцев малого бизнеса используют личные сбережения, чтобы начать свой бизнес. Ведите учет, который показывает ваши инвестиции в бизнес.

Однако есть и другие способы получить финансирование для стартапа, если вы не хотите брать на себя весь риск.

4. Условия

Что это: состояние вашего бизнеса — растет он или шатается — а также то, на что вы будете использовать средства. Он также учитывает состояние экономики, отраслевые тенденции и то, как эти факторы могут повлиять на вашу способность погасить кредит.

Почему это важно: Чтобы гарантировать погашение кредитов, банки хотят кредитовать предприятия, работающие на благоприятных условиях.Они стремятся выявлять риски и соответственно защищать себя.

Как оценивается: на основе обзора конкурентной среды, отношений с поставщиками и клиентами, а также макроэкономических и отраслевых вопросов.

Как это освоить: Вы не можете контролировать экономику, но вы можете планировать заранее. Хотя это может показаться нелогичным, подайте заявку на кредитную линию для бизнеса, когда ваш бизнес силен.

«Банки всегда будут рады одолжить вам деньги, когда они вам не нужны», — говорит Фаррис.Если условия ухудшатся, они могут сократить кредитную линию или вовсе ее отменить, добавляет он, но, по крайней мере, у вас есть некоторая подушка безопасности на некоторое время, если дела пойдут плохо.

5. Обеспечение

Что это: активы, которые используются для гарантии или обеспечения кредита.

Почему это важно: Залог — это резервный источник, если заемщик не может погасить кредит.

Как оценивается: От твердых активов, таких как недвижимость и оборудование; оборотный капитал, такой как дебиторская задолженность и товарно-материальные запасы; и дом заемщика, который также может считаться залогом.

Как справиться с этим: выбор правильной бизнес-структуры может помочь защитить ваши личные активы от конфискации кредитором, если вам предъявят иск или если кредитор пытается взыскать. Создание юридического лица помогает снизить этот риск.

Расшифровка физических принципов двухкомпонентного биомолекулярного фазового разделения

Основные версии:

Следующий список комментариев довольно длинный, но я полагаю, что большинство из них можно устранить без дополнительной дополнительной работы:

По поводу презентации

1) Среднестатистический читатель eLife, скорее всего, запутается из-за различных используемых терминов.Мономеры используются в некоторой степени взаимозаменяемо для обозначения конкретных модулей внутри ассоциативного полимера или отдельного ассоциативного полимера. Я рекомендую использовать термин «наклейка» или «домен» (первый более точен) для обозначения отдельных модулей внутри ассоциативных полимеров. Затем авторы могут четко объяснить, что они оценивают влияние: (а) изменения валентности наклеек при сохранении фиксированной общей стехиометрии наклеек; (b) варьирование общей стехиометрии (концентрации) наклеек при фиксированной валентности; и (c) как для (a), так и для (b) они также титруют силу взаимодействий между наклейками. Рамка, определяющая ключевые термины, и рисунок, показывающий, что именно титруется и как, были бы очень полезны авторам.

Мы согласны с рецензентами в том, что для читателей eLife удобнее использовать стикеры/домены для ссылки на конкретные модули в ассоциативных полимерах, и внесли соответствующие изменения во всю рукопись. Мы также добавили рисунок 1 вместе с подписью к нему, чтобы он служил ориентиром в нашей работе.

2) Основные важные особенности рис. 4A и B следует пояснить более четко.В частности, фигура 4B не обсуждается в тексте.

Мы согласны – мы добавили в текст больше обсуждения рисунка 4:

«Что касается концентрации плотной фазы, то она монотонно уменьшается по мере отклонения глобальной стехиометрии стикера от 1 и уменьшения валентности полимеров (рис. 5Б). Это еще раз указывает на то, что аномальная зависимость концентрации разбавленной фазы от валентности и стехиометрии не является следствием особых свойств плотной фазы.

Относительно модели

3) Распорки вряд ли будут пассивными. Это замечание было отмечено в нескольких статьях, использующих формализм стикеров и прокладок. См.: https://elifesciences.org/articles/30294. Соответственно, будет иметь место взаимодействие между эффектами проставок и триадой эффектов из-за наклеек. Последствия в значительной степени игнорируются. Было бы важно подчеркнуть этот факт, потому что даже для двухкомпонентной системы, которая мотивирует текущую работу, существуют известные эффекты спейсеров, которые нельзя отнести к неспецифическим эффектам.См.: http://www.pnas.org/content/112/47/E6426.long.

Мы благодарим рецензентов за то, что они отметили важную недавнюю работу о роли спейсеров в фазовом разделении. Для решения этого и следующего вопроса, касающегося шкалы длины гомотипического отталкивания, мы добавили в Обсуждение следующие предложения:

«Кроме того, реальные биологические системы более сложны, чем наша простая модель. Например, может быть связывание «множество к одному», несколько компонентов, а спейсеры/линкеры также могут играть нетривиальные роли Banjade et al., 2015; Хармон и др., 2017».

«С другой стороны, концентрация плотной фазы сильно зависит от стерического отталкивания — увеличение размера стикера с 2,5 нм до 2,9 нм снижает концентрацию плотной фазы в 2 раза (Приложение 1 — рис. 5Б). Это согласуется с результатами предыдущих исследований роли линкеров: самоизбегающий линкер со случайной спиралью, который занимает большой объем, может существенно снизить концентрацию плотной фазы и даже предотвратить фазовое разделение Harmon et al., 2017».

4) Специфические межстикерные взаимодействия должны быть анизотропными (см. Choi et al., 2020a). В модели, используемой для моделирования, межстикерные взаимодействия изотропны. Чтобы обойти эту проблему, потенциал включает отталкивающий термин между наклейками одного типа. Это создает загадку, потому что вводит дополнительные шкалы энергии и длины. Поэтому эффективные энергии гетеротипного межстикерного взаимодействия будут отличаться от того, что предписывают значения для U ₀ .Дополнительное значение имеет разбавляющий эффект гомотипных отталкивающих взаимодействий. Это может иметь нетривиальные последствия для многих тел и, кроме того, повлияет на распределение размеров скоплений и давление. Было бы полезно, если бы авторы представили две детали анализа своих симуляций: как масштабируется внутреннее давление с масштабами энергии и длины, связанными с отталкивающими гомотипными взаимодействиями? И как эти отталкивающие взаимодействия влияют на зависимость U ₀ эффекта магического соотношения? Одного набора расчетов должно быть достаточно.

Ur(r)=4ϵ[(σr)12−(σr)6+14], r<21/6σ,

Мы согласны с рецензентами в том, что биологические взаимодействия «наклейка-наклейка» анизотропны. Именно эта анизотропия и исключение объема между наклейками приводят к взаимно однозначной ассоциации. Разработанная нами модель сильно упрощена, в ней сохранено ключевое свойство (однозначная ассоциация), но удалены детали, характерные для системы. Таким образом, это концептуальная модель. При этом наш подход не вводит дополнительных масштабов энергий или длин: отталкивающие взаимодействия между одинаковыми наклейками соответствуют стерическому отталкиванию, которое должно присутствовать в любой модели, и масштаб энергии этого отталкивания практически не имеет значения, поскольку отталкивающие взаимодействия эффективно режим отталкивания «жесткой сферы».Количественные описания реальных систем, скорее всего, потребуют дополнительных функций, например, использования липких заплат для моделирования анизотропного связывания. Чтобы ответить на вопрос обозревателей о зависимости от масштаба длины отталкивания, мы провели новое моделирование для системы A8:B8. Здесь мы использовали стандартный потенциал отталкивания ЛД для взаимодействий между стикерами одного типа, где ϵ=1kBT. Чтобы изучить роль шкалы длины отталкивания, мы использовали два варианта диаметра наклейки σ = 2. 9 нм (второй вириальный коэффициент соответствует мягкому потенциалу LJ, используемому в рукописи) и меньший шарик σ = 2,5 нм. Потенциал связи и притяжение между наклейками разных типов такие же, как и ранее (т. е. уравнения 16 и 18 в рукописи), за исключением того, что мы использовали параметры связывания r ₀ = 1,5 нм и U0 = 12kBT, которые приводят к более слабому связыванию. . Концентрации прилипателей разбавленной и плотной фаз и объемная доля плотной фазы для диаметра гранул σ = 2,9 нм показаны на изображении ответа автора 1, а для σ = 2.5 нм показаны на изображении ответа автора 2.

(Обратите внимание, что перекрывающийся объем между двумя связанными наклейками учитывается один раз при расчете объемной доли, т. т. е., две полностью перекрывающиеся наклейки заняли бы объем одной наклейки.) Также обратите внимание, что, поскольку мы использовали гармонический потенциал для линкерных связей основной цепи, который имеет четко определенную среднюю длину связи 4,7 нм (не чувствительную к выбору σ), изменения концентраций разбавленной и плотной фаз отражают исключительно эффект гомотипных отталкивающих взаимодействий. (В пункте 13 ниже мы показываем, как эти величины зависят от длины линкера.) Сравнивая два случая, авторы обзора, безусловно, правы в том, что существует разбавляющий эффект гомотипических отталкивающих взаимодействий.Более сильное отталкивание/больший масштаб длины отталкивания приводит к меньшей концентрации и объемной доле в плотной фазе. Начальная сила связывания U0 для эффекта магического числа/магического отношения также становится выше. Для σ = 2,9 нм эффект магического отношения практически отсутствует при U0 = 12kBT, а эффект есть при U0 = 14kBT (аналогично тому, что показано на рис. 3 в рукописи), тогда как для σ = 2,5 нм эффект уже заметен. весьма существенно при U0=12kBT.

В связи с этим эффектом, если бы мы явно моделировали линкеры и если бы линкеры попадали в категорию самоизбегающих случайных катушек (SARC) (Harmon et al., 2017), то качественно, по сравнению с линкером со случайной спиралью Флори (FRC), эффект линкера SARC можно рассматривать как увеличение масштаба отталкивающей длины стикеров (предположим, что линкеры SARC и FRC имеют одинаковое среднее значение сквозной длины). расстояние), и, следовательно, может привести к ослаблению эффектов магического числа/магического отношения.

Пожалуйста, ознакомьтесь с дополнительными замечаниями, которые мы добавили к Обсуждению, отмеченному в нашем ответе на пункт 3.

О характере перехода

5) Теория димерного геля очень интересна.Следуя Harmon et al., 2017 и 2018, Choi et al., 2019, и фундаментальной работе Semenov and Rubinstein, 1998, важно признать, что фазовые переходы в ассоциативных полимерных системах лучше всего рассматривать как фазовое разделение, которому способствует перколяция. Соответственно, было бы полезно рассчитать порог перколяции на основе моделирования и теории. Для вычислительной работы это поможет нам понять, как U ₀ , магическое соотношение и валентность влияют на взаимодействие между переходами плотности (также известными как разделение фаз) и перколяцией.Кроме того, есть два новых обобщения работы Семенова и Рубинштейна, которые имеют отношение к теоретической работе здесь. См.: https://doi.org/10.1021/acs.macromol.8b00661 и http://dx.doi.org/10.1103/PhysRevE.102.042403. Сравнение этих обобщений и представленной здесь теории димерного геля было бы очень полезным и познавательным, особенно в контексте кооперативности связей.

Мы согласны с рецензентами в том, что плотная фаза ассоциативных полимеров представляет собой перколяционную сеть, и мы благодарим рецензента за то, что он указал нам на соответствующие теории.Насколько нам известно, и как утверждали Семенов и Рубенштейн, порог объемной перколяции (также известный как переход гомогенного гелеобразования) существует только при высоких температурах/слабом связывании, когда не происходит разделения фаз. Однако наше текущее исследование сосредоточено на низкотемпературном режиме. При этих низких температурах, хотя мы ожидаем, что порог перколяции cp будет лежать между концентрациями разбавленной и плотной фаз, если бы мы моделировали систему при cp, система автоматически разделилась бы на фазы. Тем не менее, следуя предложению рецензентов, мы можем получить некоторое представление о характеристической плотности для гомогенной перколяции в нашей модели, охарактеризовав порог перколяции в режиме слабого связывания U0=8kBT, который позволяет избежать разделения фаз, но также предотвращает связывание многие к одному. .Чтобы представить эти результаты, мы включили новый раздел и рисунок в Приложение 1 (подраздел «Определение порога перколяции», Приложение 1 — рисунок 3).

Мы также выделили соответствующие теории, обобщающие работы Семенова и Рубинштейна в Обсуждении:

«Одним из основных предположений теории димер-геля является приближение среднего поля. […] Это приближение отражает ключевую особенность плотной фазы, а именно то, что один полимер связывается с несколькими партнерами.

6) Повсюду, но наиболее заметно в подразделе «Результаты теории димерного геля», кажется, что происходит путаница фазового разделения (в результате термодинамической нестабильности) и гелеобразования (переход связности). Эти два случая необходимо разграничить более четко.

Поскольку плотная фаза ассоциативных полимеров представляет собой гель, мы использовали термин «гель» взаимозаменяемо с «плотной фазой» в некоторых случаях. Чтобы избежать возможной путаницы, мы внесли следующие изменения:

«Однако размер кластера может отражать перколяционный переход золь-гель, а не термодинамический фазовый переход Harmon et al., 2017, и, таким образом, обеспечивает в лучшем случае качественную меру фазового разделения».

«Сравнивая два выражения, димеры предпочтительнее при низких концентрациях, тогда как сеть независимых связей предпочтительнее при высоких концентрациях».

7) Являются ли фазовые границы (как теоретические, так и полученные при моделировании) спинодальными или бинодальными?

Фазовые границы являются бинодальными, и теперь мы прояснили этот момент: «Чтобы найти бинодальные фазовые границы, мы моделируем сотни полимеров типа А и В…» и «Наконец, чтобы выделить бинодальные фазовые границы, мы подставляем…»

Касательно моделирования

8) Протокол MD необычен. Зачем включать гармонические потенциалы связи (вместо FENE)? Зачем использовать смягченный ЖЖ-потенциал с привлекательным хвостом?

Ur(r)=4ϵ[(σr)12−(σr)6+14], r<21/6σ.

Ub(r)=−12KR02ln⁡[1−(r−σR0)2], r<σ+R0.

Ua(r)=−12U0(1+cos⁡πrr0), r

Мы согласны с рецензентами в том, что наши потенциалы MD не являются самым стандартным выбором. Одной из причин, по которой мы использовали гармонический потенциал и смягченный LJ-потенциал, было ускорение моделирования МД, поскольку смягченные потенциалы допускают больший временной шаг интегрирования.Чтобы продемонстрировать устойчивость наших выводов к выбору потенциалов MD, мы выполнили новое моделирование для системы A8: B8 с использованием FENE и стандартных потенциалов LJ. Вкратце, взаимодействие между наклейками одного типа является чисто отталкивающим. Возьмем ϵ=1kBT и σ=3 нм, что дает отталкивающий потенциал, сравнимый с нашим предыдущим смягченным потенциалом ЛД. Соседние стикеры связаны потенциалом FENE. Примем K=0,3kBT/нм2 и R0=7 нм, что (вместе с отталкивающим взаимодействием) дает одинаковую среднюю длину связи 4.7 нм, как и для нашего предыдущего гармонического потенциала. (Этот потенциал напоминает разупорядоченный линкер FCS из 20 аминокислот с длиной персистентности 0,8 нм.) Привлекательное взаимодействие между различными типами наклеек имеет ту же форму, что и в нашей рукописи: где r0 = 1,5 нм — расстояние отсечки. Для U0=14kBT мы показываем общие концентрации разбавленной и плотной фаз на изображении ответа автора 3.

Результаты качественно не изменились по сравнению с результатами, представленными на рисунке 3 в нашей рукописи.Количественно концентрации в разбавленной фазе снижаются в 2 раза, а концентрации в плотной фазе сравнимы с заявленными значениями. Мы заключаем, что наши концептуальные результаты по эффектам магического числа/магического отношения устойчивы к детальному выбору потенциалов.

Обычно движения Монте-Карло необходимы для принудительного связывания 1:1 (первопроходец – Арлетт Бальон) или тщательно разработанной комбинации потенциалов двух и трех тел (первопроходец – Франческо Шортино). Модель в текущей рукописи также может преуспеть в обеспечении привязки 1: 1, но это необходимо доказать и показать, чтобы не вводить другие предубеждения.

Тестирование на предвзятость, безусловно, важно. Мы всегда проверяли количество связанных партнеров для всех наклеек в наших симуляциях. Наклейка считается партнером другой наклейки, если они относятся к разным типам и находятся в пределах отсечки r0 потенциала притяжения. В наших симуляциях средняя доля наклеек, у которых есть более одного партнера, составляет менее 0,001%.

Что касается других возможных предубеждений, отметим, что динамику Ланжевена можно рассматривать как шаги, направленные на достижение термодинамического равновесия.Мы тщательно спроектировали начальное состояние системы и достаточно долго проводили симуляции, чтобы система полностью уравновесилась, и, таким образом, уверены в отсутствии отклонения от равновесия.

Одна из возможных «предвзятостей» заключается в том, что наклейки перекрываются при переплете, что приводит к уменьшению объема. В принципе, это могло бы усилить эффект «связывания, стимулируемого скоплением» в плотной фазе, т. е. связыванию, дополнительно благоприятствующему результирующему уменьшению объема. Однако объемная доля плотной фазы, ~10%, невелика, поэтому этот эффект очень скромен.

9) Анализ фазового разделения результатов МД можно объяснить более строго. Какие проверки были выполнены для подтверждения фазового разделения, а не перехода золь-гель или других артефактов подготовки к моделированию. Подтвердили ли вы, что две образовавшиеся фазы находятся в химическом и механическом равновесии? Имеют ли моделируемое давление или структурный фактор признаки фазового разделения?

Разделение фаз и золь-гель переход могут быть неоднозначными в высокотемпературном режиме и/или близкими к критической точке.В нашем случае мы работаем в сильноконденсированном режиме, т. е. при низкой температуре и адекватных концентрациях полимера, и исключили системы, в которых концентрации разбавленной и плотной фаз становятся сравнимыми (например, система А8:В8 при соотношении липкости А:В). 8:6). Для всех систем, представленных в рукописи, имеется четко определенный большой кластер плотной фазы, расположенный в небольшой области окна моделирования, и разбавленная фаза полимеров/олигомеров, рассеянных по всей остальной части окна (репрезентативные снимки приведены ниже). показано на рис. 2C и 2D), поэтому ясно, что эти системы являются фазово-разделяющимися (и, таким образом, подвергаются гелеобразованию в плотной фазе, обусловленному фазовым разделением).

Динамика Ланжевена обеспечивает распределение Больцмана. Мы тщательно спроектировали начальное состояние системы (полностью связанная плотная фаза), чтобы предотвратить застревание системы в локальном минимуме (например, в рассеянных плотных каплях, которым требуется много времени для слияния). Затем мы провели длительное моделирование, чтобы позволить плотной фазе уравновеситься с разбавленной фазой. Время релаксации системы зависит от времени жизни связи «стикер-стикер» τ. Чтобы убедиться, что разбавленная и плотная фазы находятся в равновесии, все модели были уравновешены примерно за 2000 τ до записи данных.Мы также проверили, есть ли систематические отклонения между первой и второй половиной записанного моделирования, и нашли согласованные результаты между двумя половинами.

Мы добавили несколько предложений, чтобы сделать обсуждение разделения фаз более строгим:

«В наших симуляциях в среднем доля наклеек, у которых есть более одного партнера, составляет менее 0,001%.» и «Время релаксации системы зависит от времени жизни связи стикер-стикер; чтобы убедиться, что разбавленная и плотная фазы находятся в равновесии…»

О результатах и ​​обсуждении

10) Предположение о среднем поле позволяет получить полезные аналитические результаты, но не ожидается, что оно будет действительным для моделируемых и обсуждаемых типов систем.Цепочки такой короткой длины не перекрываются в большинстве обсуждаемых режимов концентрации, а расположение наклеек сильно коррелирует вместо среднего поля. Далее, как и следовало ожидать, симуляции C.E. Sing. и А. Александер-Кац (Macromolecules 2011) показали, что описания стикеров-спейсеров не распространяются на случай, когда каждая бусина липкая.

Мы согласны с рецензентами в том, что предположение о среднем поле неверно во всем диапазоне возможных концентраций, поскольку цепи могут не перекрываться.Однако, чтобы найти границы разбавленной и плотной фаз с помощью нашего анализа выпуклой оболочки, нам нужно только, чтобы наше приближение среднего поля для плотной фазы было действительным в режиме концентрации, сравнимом с концентрациями плотной фазы. Приближение среднего поля все еще не является полностью количественным при концентрациях плотной фазы, поскольку мы обнаружили корреляции в связывании в наших моделях (длина корреляции ~ 1,8 шарика), которые выходят за рамки теории среднего поля. Следовательно, смоделированная система A14:B14 имеет эффективную валентность ~8 и, следовательно, теоретически ведет себя больше как система A8:B8. Тем не менее, теория работает лучше для систем с более длинными линкерами (или меньшими гранулами), где связывание менее коррелировано в плотной фазе.

11) Основным ограничением работы являются очень короткие цепочки, используемые в МД-моделировании и необходимые для того, чтобы результаты были полезными. В истинно полимерном пределе и для большинства реальных систем количество шариков и наклеек на порядок больше, чем обсуждается в статье. При таком большом пределе N этот эффект магического отношения становится довольно тривиальным.Следует должным образом обсудить степень, в которой представленные результаты являются характеристикой дискретного предела очень коротких олигомеров.

Наша работа сосредоточена на белках с комплементарными доменами («стикерами»), а не на внутренне неупорядоченных белках, которые могут иметь очень большое количество эффективных стикеров. Примеры систем, которые мотивировали нашу работу, включают SUMO-SIM (Banani et al. , 2016), SHR-PRM (Li et al., 2012) и Rubisco-EPYC1 (Rosenzweig et al., 2017), которые все короткие в том смысле, что на каждый полимер приходится <10-15 наклеек.Тем не менее, эффекты магического числа/магического отношения распространяются на большие N , и фактически эффекты становятся сильнее с увеличением валентности полимера (рис. 3 в рукописи).

12) Результаты на рисунке 3 вызывают некоторые вопросы. Результаты в левой колонке показывают другую немонотонную зависимость концентрации разбавленной фазы от соотношения концентраций мономеров A:B (лучше всего называемого отношением концентраций стикеров A:B) по сравнению с концентрацией плотной фазы.Во-первых, учитывая наличие двух видов, как концентрации в разбавленной и плотной фазах сводятся к одному числу?

Концентрации, показанные на рис. 3, представляют собой сумму концентраций стикеров A и B, которую мы теперь называем общей концентрацией стикеров.

Во-вторых, в конечном итоге возникает режим, при котором концентрация «стикеров» в разбавленной фазе увеличивается, а концентрация «стикеров» в плотной фазе также увеличивается, что, по-видимому, приводит к сохранению ширины двухфазного режима. Точно так же противоположный сценарий имеет место в другом режиме, при котором концентрация разбавленной фазы уменьшается, а в правой колонке мы видим уменьшение концентрации плотной фазы. Означает ли это, что ширина двухфазного режима, определяемая количественно как log10 (c _{плотный} / c _{разбавленный} ), остается неизменной при изменении соотношения концентраций наклеек A:B? Этот аспект требует некоторого осмысления и дальнейшего анализа или уточнения.

Это, безусловно, правильные утверждения.Фактически, немонотонная зависимость концентрации разбавленной фазы от отношения липких частиц A:B является отличительной чертой эффекта магического числа/магического отношения. Возьмем моделирование в пункте 8 в качестве примера: c _{плотный} /c _{разбавленный} в зависимости от отношения концентрации наклеек A:B (на графике в логарифмическом масштабе) сначала увеличивается, а затем уменьшается по мере отклонения отношения A:B от 1. Эта немонотонность полностью обусловлена ​​эффектом магического числа/магического отношения, повышающим концентрацию разбавленной фазы при равном отношении А:В.

Я что-то упускаю, потому что вывод, который я делаю из увеличения концентрации разбавленного рукава, заключается в ослаблении движущих сил разделения фаз. Однако если это сопровождается увеличением концентрации плотной фазы, то это будет означать, что, несмотря на кажущееся уменьшение движущих сил фазового расслоения, увеличение концентрации плотной фазы приводит к выравниванию химического потенциала с разбавленная фаза.Обратное также, по-видимому, следует из результатов. И это вызывает недоумение.

Для обычного фазового разделения полимеров (таких как системы, описываемые теорией среднего поля Флори-Хаггинса) увеличение концентрации разбавленной фазы связано с ослаблением движущих сил фазового разделения и, следовательно, пониженной концентрацией плотной фазы. Однако это не всегда так для более сложных систем, в частности, когда разделение фаз обусловлено не просто конкуренцией между энергией и энтропией.Для нашей двухкомпонентной системы фазовое разделение по существу обусловлено конкуренцией между трансляционной и конформационной энтропией. Вкратце, по мере того, как соотношение склеек A:B приближается к 1, концентрация разбавленной фазы увеличивается. Это означает, что химический потенциал димеров в разбавленной фазе увеличивается. Так как плотная фаза находится в равновесии с разбавленной фазой, химический потенциал в плотной фазе обязательно также увеличивается. С точки зрения механизма, почему плотная фаза имеет более высокую концентрацию и более высокий химический потенциал при соотношении A:B, равном 1? На самом деле это верно только в режиме сильной привязки.Поскольку при сильном связывании при соотношении А:В, равном 1, все наклейки должны быть спарены, это приводит к сжатию плотной фазы и, следовательно, к высокой концентрации. Это же сжатие приводит к конформационным фрустрациям в плотной фазе, уменьшает конформационную энтропию и тем самым повышает химический потенциал.

13) Концентрации плотной и разбавленной фаз, по-видимому, никогда не различаются более чем на порядок. Это тоже вызывает недоумение. Кроме того, концентрации даже в разбавленной фазе находятся в миллимолярном диапазоне.

Мы согласны с рецензентами в том, что наши отношения концентраций в плотной и разбавленной фазах, а также концентрации в разбавленной фазе не находятся в диапазоне, типичном для большинства биологических систем. Мы исследовали, как эти величины зависят от параметров моделирования. В частности, мы обнаружили, что концентрация разбавленной фазы очень чувствительна к длине линкера. Принимая U0=12kBT, K=0,3kBT/нм2 и R0=7нм (линкер FRC из 20 аминокислот с персистентной длиной 0,8 нм, средняя длина связи 4.7 нм), все остальные параметры такие же, как в пункте 8, см. ответ автора на изображении 5, где U0=12kBT, K=0,15kBT/нм2, а R0=14 нм (линкер FRC из 40 аминокислот с персистентной длиной 0,8 нм, средняя длина связи 5,9 нм) выход показан на изображении ответа автора 6

Так, при увеличении длины линкера ~25% концентрация разбавленной фазы падает более чем в 10 раз, а концентрация плотной фазы остается практически неизменной. Таким образом, с минимальными модификациями достижимы более высокие отношения концентраций плотной фазы к разбавленной фазе и более низкие концентрации разбавленной фазы. Мы признаем, что выбор многих параметров в рукописи, по крайней мере, частично мотивирован повышением скорости моделирования. Мы включили приведенные выше результаты в нашу рукопись «Уменьшение стерического отталкивания между шариками одного типа имеет аналогичный эффект (Приложение 1 — рисунок 5A). Что еще более важно, увеличение средней длины линкера с 4,7 нм до 5.9 нм приводит к более чем 10-кратному снижению концентрации разбавленной фазы (Приложение 1 — рисунок 6А)…» и новый раздел «Эффекты неспецифических взаимодействий и длины линкера» в Приложении 1.

И есть запутанное преобразование энергии взаимодействия 9kT в константы диссоциации, которые оказываются довольно высокими, в миллимолярном диапазоне. Это сбивает с толку, потому что авторы предполагают, что эти оценки находятся на одном уровне с взаимодействиями SUMO-SIM и SHR-PRM, что не так, поскольку эти взаимодействия находятся в низком мкМ, а не в миллимолярном диапазоне.

Kd=[∫0r04πr2exp[−Ua(r)kBT]dr]−1,

Мы разработали наши потенциалы так, чтобы они попадали в диапазон типичных значений Kd для наклеек-наклеек. Константу диссоциации стикер-стикер можно найти по формуле где r0 — расстояние отсечки для потенциального притяжения. U0 — минимум Ua(r). Важно отметить, что Kd определяется не только U0, но и объемом связывающего кармана. Мы нашли Kd = 0,4 мМ для U0 = 9kBT и r0 = 2 нм на основе приведенного выше выражения. Сообщенная константа диссоциации стикер-стикер для SUMO-SIM составляет Kd=0.01 мМ (Banani et al., 2016), а для SHR-PRM Kd=0,35 мМ (Li et al., 2012). Эффекты магического числа/магического отношения усиливаются с увеличением силы связывания. Мы находим, что Kd≲0,4 мМ обеспечивает грубый порог для начала этих эффектов, хотя этот порог также зависит от валентности полимеров, размера наклейки, длины связи и т. д.

Здесь возникает проблема с преобразованием единиц измерения в молярные шкалы. Я рекомендую использовать объемные доли. Для полимерных систем объемные доли являются наиболее надежным способом количественного определения концентраций — момент, подчеркнутый Флори еще на заре науки о полимерах.

Мы согласны с рецензентами в том, что объемная доля является разумной величиной для характеристики концентрации плотной фазы, объемные доли плотной фазы составляют ~ 10% в моделировании в нашей рукописи. Соответственно, мы добавили эту количественную оценку в текст, где она будет наиболее полезной. «Мы также сообщаем в Приложении 1 (рисунок 5C) объемную долю полимеров в плотной фазе, которая составляет ~ 10%, что сравнимо с объемной долей белков в цитоплазме клетки».

14) Наконец, учитывая аудиторию, т.е.е., читатели eLife, насущная озабоченность будет относиться к режиму и системам, в которых проявляются эффекты магического числа и магического отношения. Это может быть актуально и/или применимо в инженерных системах. Об этом говорится в Обсуждении. Также может быть так, что, учитывая довольно сильные взаимодействия, необходимые для наблюдения эффекта магического числа и / или магического отношения, это может быть невозможно реализовать в естественных условиях. Проблемой при высоких силах взаимодействия будут проблемы с растворимостью, образованием осадков и/или началом стеклования.Фактически, последнее считается важным для биологии, см. https://doi.org/10.1016/j.sbi.2016.05.002 и https://elifesciences.org/articles/09347. Действительно, моделирование Choi et al., 2019 показывает начало стеклообразного поведения по мере увеличения силы взаимодействия или снижения температуры.

Мы разделяем ту же неуверенность, что и рецензенты, могут ли эффекты магического числа/магического отношения проявляться и использоваться клетками как способ регулирования конденсата. С чисто теоретической точки зрения, пока константа диссоциации стикер-стикер ниже определенного (субмиллимолярного) порога, есть вполне реальная возможность наблюдать эти эффекты. В этом смысле многие компоненты конденсатных лесов удовлетворяют этому критерию. Однако реальные биологические системы, конечно, намного сложнее нашей простой модели. Могут быть соединения «множество к одному», несколько компонентов, и, как было указано рецензентами, распорки также могут играть важную, но сложную роль. Таким образом, актуальность изученных здесь эффектов in vivo остается открытым вопросом.

Может ли быть так, что эффекты магического числа или соотношения маскируются приводом, чтобы избежать осадков и/или стеклообразного поведения? В качестве альтернативы, как предполагают авторы, эффект магического числа/отношения может быть способом регулирования фазового поведения.Некоторая разработка этих вопросов, помимо того, что предлагается в настоящее время, может быть полезна читателю, особенно если она может сопровождаться указателями на конкретные системы, мотивирующие экспериментальные исследования.

Мы благодарим рецензентов за то, что они поделились этими интересными мыслями, и мы соответствующим образом изменили текст «Однако эффект магического отношения не наблюдался в этих системах Li et al. , 2012; Banani et al., 2016, возможно, из-за несоответствия размера и длины линкера между двумя ассоциированными полимерами.[…] В настоящее время актуальность in vivo эффектов, изученных в этой работе, остается открытым вопросом».

Принципы Сан-Хосе — Dirección de Cambio Climático

О Принципах Сан-Хосе

Первоначальный документ Принципов Сан-Хосе в отношении высоких амбиций и честности на международных углеродных рынках гласит:

На предварительном заседании КС [ 25, Коста-Рика, 2019 г.], большое количество участников поделились своими ожиданиями относительно того, что необходимо для достижения надежных и амбициозных результатов по статье 6.Они придерживались мнения, что выполнение Парижского соглашения должно быть прочно основано на том, что, согласно лучшим имеющимся научным данным, необходимо для достижения долгосрочной цели Соглашения по температуре: максимально возможное стремление к смягчению последствий и адаптации.

По мере приближения окончания второго периода действия Киотского протокола существует настоятельная потребность в ясности в отношении будущей международной основы для использования рыночных подходов к достижению международных целей в области климата.

Они выразили поддержку председательству в COP и совместной работе с другими для достижения амбициозных результатов в Мадриде для реализации следующих принципов посредством свода правил статьи 6, который как минимум:

• Обеспечивает целостность окружающей среды и обеспечивает максимально возможный смягчение амбиций.
• Обеспечивает общее снижение глобальных выбросов, выходя за рамки компенсационных подходов с нулевой суммой, чтобы помочь ускорить сокращение глобальных выбросов парниковых газов.
• Запрещает использование единиц до 2020 года, Киотских единиц и надбавок, а также любые лежащие в их основе сокращения для достижения Парижского соглашения и других международных целей.
• Обеспечивает недопущение двойного учета и то, что любое использование рынков для достижения международных целей в области климата подлежит соответствующим корректировкам.
• Избегает фиксации уровней выбросов, технологий или углеродоемких методов, несовместимых с достижением долгосрочной цели Парижского соглашения по температуре.
• Применяет методологии распределения и базовые методологии, которые поддерживают национальные достижения NDC и способствуют достижению долгосрочной цели Парижского соглашения по температуре.
• Использует CO2-эквивалент в отчетности и учете выбросов и абсорбции, полностью применяя принципы прозрачности, точности, согласованности, сопоставимости и полноты.
• Использует централизованную и общедоступную инфраструктуру и системы для сбора, отслеживания и обмена информацией, необходимой для надежного и прозрачного учета.
• Обеспечивает стимулы для прогресса и поддерживает все Стороны в достижении целей по выбросам в масштабах всей экономики.
• Вносит вклад в количественные и предсказуемые финансовые ресурсы, которые будут использоваться Сторонами, являющимися развивающимися странами, которые особенно уязвимы к неблагоприятным последствиям изменения климата, для покрытия расходов на адаптацию.
• Признает важность наращивания потенциала для обеспечения максимально широкого участия Сторон в соответствии со Статьей 6.

Они также признают важность Статьи 6.8 в поддержке Сторон в реализации их ОНУВ с помощью нерыночных подходов.

Они пригласили другие страны, многонациональные и субнациональные организации и многонациональные учреждения присоединиться к нам в полной реализации всех вышеперечисленных принципов, чтобы поддержать максимально возможные амбиции и экологическую целостность.

7 принципов | Центр передового опыта в универсальном дизайне

7 принципов универсального дизайна были разработаны в 1997 году рабочей группой архитекторов, дизайнеров, инженеров и исследователей экологического дизайна под руководством покойного Рональда Мейса в Государственном университете Северной Каролины.Цель Принципов состоит в том, чтобы направлять дизайн среды, продуктов и коммуникаций. По данным Центра универсального дизайна NCSU, Принципы «могут применяться для оценки существующих проектов, руководства процессом проектирования и обучения как дизайнеров, так и потребителей характеристикам более удобных продуктов и сред».

Принцип 1: Справедливое использование
Дизайн полезен и востребован людьми с разными способностями.

Инструкции:

1a.Обеспечьте одинаковые средства использования для всех пользователей: идентичные, когда это возможно; эквивалентно, если нет.

1б. Избегайте разделения или стигматизации пользователей.

1с. Положения о конфиденциальности, безопасности и безопасности должны быть в равной степени доступны для всех пользователей.

1д. Сделайте дизайн привлекательным для всех пользователей.

Инструкции:

2a.Предоставление выбора в способах использования.

2б. Обеспечьте доступ и использование правой или левой рукой.

2с. Повысить точность и аккуратность пользователя.

2д. Обеспечить адаптивность к темпу пользователя.

Инструкции:

3a. Избавьтесь от ненужной сложности.

3б. Будьте в соответствии с ожиданиями и интуицией пользователей.

3с. Приспособиться к широкому спектру грамотности и языковых навыков.

3д. Расположите информацию в соответствии с ее важностью.

3д. Обеспечивайте эффективные подсказки и обратную связь во время и после завершения задачи.

Инструкции:

4a. Используйте разные способы (изобразительный, вербальный, тактильный) для избыточного представления важной информации.

4б. Обеспечить адекватный контраст между важной информацией и ее окружением.

4с. Максимально удобочитаемость важной информации.

4д. Дифференцируйте элементы способами, которые можно описать (т. е. упростите предоставление инструкций или указаний).

4д. Обеспечьте совместимость с различными методами или устройствами, используемыми людьми с сенсорными ограничениями.

Инструкции:

5a. Расположите элементы так, чтобы свести к минимуму опасности и ошибки: самые используемые элементы, самые доступные; опасные элементы устранены, изолированы или экранированы.

5б. Предупреждать об опасностях и ошибках.

5с. Обеспечить отказоустойчивые функции.

5д. Не поощряйте неосознанные действия в задачах, требующих бдительности.